유형이 불가능한 헤모필루스 인플루엔자에 감염된 마우스 모델의 기관지폐포 세척액 수집

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초록

이 비디오는 다운스트림 분석을 위해 유형화할 수 없는 헤모필루스 인플루엔자 에 감염된 안락사된 마우스로부터 기관지폐포 세척액을 수집하고 처리하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

기관지폐포 세척액(BALF) 수집
1. 감염 후 24시간 후에 자궁경부 탈구로 마우스를 희생합니다.
2. 해부학적 가위로 마우스의 복강을 열고 복부 대동맥을 잘라 출혈을 일으키고 폐의 복부 부분을 노출시킵니다.
3. 기관을 노출시키고 20게이지 카테터로 삽관합니다. BALF 완충액 0.8ml(1x PBS(인산염 완충 식염수), 0.1% 포도당, 10U/ml 헤파린)를 주입하고 부드러운 흡인으로 세척액을 수집합니다. 이 절차를 세 번 반복합니다.
4. 트리판 블루 염색과 함께 10배 배율의 혈구계를 사용하여 100μl의 BALF 현탁액 중 총 세포 수를 계산합니다.
5. 수정된 Giemsa 염색을 위한 슬라이드를 준비합니다. 100μl의 BALF를 사이토스핀의 적절한 웰에 분취하고 5분 동안 500 x g에서 원심분리합니다. 슬라이드를 10분 동안 건조시키고 제조업체의 프로토콜에 따라 수정된 Giemsa 염색제를 사용하여 세포를 염색합니다.
6. 나머지 세포는 형광 활성화 세포 분류(FACS), 공초점 현미경, 유전자 발현 및 웨스턴 블롯과 같은 후속 분석에 사용될 수 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호
무수 포도당	테모 사이언티픽	R01300
덤플링을	호스피라, Inc	RL-3010 시리즈
주사기 바늘 20/26G	BD	(REF305115/175)
주사기 1ml	BD	참조 309602
카테터 20GA	BD	참조 381433
핀셋 #5 스테인리스 스틸, 길이 11cm	켄트사이언티픽	INS600095
5ml 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브	BD	참조 352058
1.5ml 미세 원심분리기 튜브	라이트 랩	A-7001-R
1X PBS(인산염 완충 식염수)	깁코	10010-023
RBC 용해 완충액 (10X)	바이오레전드	420301

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