시아노박테리아 배양 동기화 및 명암 주기에 의해 구동되는 DNA 압축

초록

출처: Murata, K. et. al., 고전압 극저온 전자 단층 촬영에 의한 시아노박테리아의 DNA 압축 시각화. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 일주기 조절 DNA 압축을 연구하기 위해 명암 주기 하에서 시아노박테리아의 동시 배양을 보여줍니다. 형광 현미경은 정의된 시점에서 응축된 DNA를 밝혀 집단 전체의 세포 주기 정렬을 확인합니다.

프로토콜

1. 시아노박테리아의 동시 배양

1. 1.5%(w/v) 한천과 0.3%(w/v) 티오황산나트륨을 함유한 멸균된 청록색 배지 11(BG 11) 플레이트(9cm 멸균 플라스틱 페트리 접시)에서 Synechococcus elongatus PCC 7942를 배양합니다.
2. 플레이트를 50μE/m²/s의 광도로 23°C의 성장 챔버에 놓고 12시간 빛/12시간 암흑 주기에 노출시킵니다.
3. 일주일에 한 번 세포를 신선한 BG11 한천 플레이트로 옮깁니다.
   메모: 한천의 배양은 이러한 배양 조건에서 일주일 후에 활발하게 증식하는 세포의 녹색 띠로 나타납니다.
4. 화염 멸균 와이어 루프로 녹색 세포 덩어리를 가져와 세포를 신선한 BG11 한천 플레이트에 줄무늬로 만듭니다. 깨끗한 벤치에서 이 작업을 수행하십시오.

2. 형광 현미경에 의한 모니터링

1. 한천 플레이트에서 6일 동안 배양한 세포를 사용하여 DNA 압축을 관찰합니다. 1mL의 0.2M 자당 용액을 세포 위에 부어 광 기간이 끝날 때 플레이트에서 세포를 수집합니다. 대부분의 세포가 수집되도록 용액을 세포에 붓는 것을 반복합니다. 부유 세포 용액을 DNA 염색을 위해 마이크로튜브로 옮깁니다.
2. DNA 염색 염료(예: Hoechst 33342) 용액을 마이크로튜브의 부유 세포 용액 500μL에 최종 농도 1μg/mL로 첨가합니다. 그런 다음 튜브를 어둠 속에 10분 동안 보관합니다.
3. 세포를 침전시키기 위해 2,000 x g 에서 1분 동안 원심분리합니다. 상청액을 버리고 0.2M 자당 용액 10μL를 첨가하여 조밀한 세포 현탁액을 얻습니다.
4. 염색된 세포를 함유한 용액 1μL를 슬라이드 유리에 옮기고, 커버 슬립을 씌운 후, 배율 100X의 대물 렌즈와 침지 오일을 사용하여 자외선(UV) 필터가 장착된 형광 현미경으로 관찰한다.
5. 대부분의 세포에서 이 지점에서 DNA 압축이 관찰되는지 확인합니다.

재료