시아노박테리아 플라스토소블의 밀도 구배 정제

초록

출처: Shivaiah, K., et al. 식물 잎 조직 및 시아노박테리아에서 Plastoglobule 지질 방울 분리. J. Vis. 경험. (2022).

이 비디오는 자당 밀도 구배 원심분리를 사용하여 시아노박테리아에서 장소구를 분리하는 방법을 보여주며, 지질이 풍부하고 밀도가 낮은 특성을 강조하고 다운스트림 분석을 위한 구조적 보존을 보장합니다.

프로토콜

1. 순수한 성형소구 수확

1. 시아노박테리아 가공
   1. 4개의 2.5mL 초원심분리기 튜브에서 4개의 2.5mL 초원심분리기 튜브에서 먼저 750μL의 배지 R 0.7과 혼합된 1.3단계의 조한 편성구를 적층시킨 다음 750μL의 배지 R 0.2와 오버레이합니다 (표 1)
   2. 자당 구배를 150,000 x g 에서 4°C에서 90분 동안 원심분리합니다. 자당 구배의 상단 위상에서 주사기와 22G 바늘로 순수 식장구 체(그림 1C) 를 수집하고 1.5mL 튜브로 옮깁니다.
   3. 순수한 plastoglobules를 분취하고 액체 질소에서 급속 동결합니다. -80°C에서 직접 보관하거나 건조 분말로 동결건조합니다.

표 1: 시아노박테리아로부터 플라스토글로블 분리를 위한 완충액 레시피.

미디엄 R	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
미디엄 R 0.2	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
	자당 0.2 M
미디엄 R 0.7	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
	자당 0.7 M

결과

그림 1: 플라스토글로불 및 틸라코이드의 분리 및 면역블로팅. (A) 자당 구배에서 추출하기 전에 Z. mays 에서 정제된 대표적인 plastoglobule 샘플. (B) 자당 쿠션에서 추출하기 전에 건조된 E. nindensis 의 대표적인 조 플라스토글로블 샘플. (C) Synechocystis ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
헴스	시그마 알드리치	H3375
염화마그네슘	시그마 알드리치	M8266
자당	시그마 알드리치	S9378
시네코시스티스 sp. PCC 6803	해당 사항 없음	해당 사항 없음
Optima MAX-TL 초원심분리기	베크만 쿨터	A95761