Phormidium lacuna 필라멘트의 활공 운동성

초록

출처: Weber, N., et al., 필라멘트 시아노박테리움 포르미디움 라쿠나의 자연 변형, 단백질 발현 및 냉동 보존. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 필라멘트 배양물을 균질화하여 균일한 현탁액을 생성하고, 현미경 슬라이드 위에 페트리 플레이트 분석 설정을 준비하고, 필라멘트 움직임을 시각화함으로써 Phormidium lacuna 의 활공 운동성을 평가하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

1. 액체 매질에서의 이동 분석
   1. 운동성을 직접 관찰하려면 P. lacuna 를 함유한 배지 8mL를 6cm 페트리 접시에 옮깁니다. 샘플이 실온에 도달할 때까지 몇 분 정도 기다린 다음 페트리 접시를 셀로판 호일로 덮습니다.
   2. 카메라가 있는 표준 현미경의 x-y 테이블 위에 현미경 슬라이드를 놓습니다. 현미경 조명을 켭니다. 이상적으로는 조명에 대해 항상 동일한 전기 및 광학 설정을 사용하는 것이 좋습니다. 4배 또는 10배 대물렌즈를 빛의 경로로 이동합니다.
   3. 페트리 접시를 슬라이드 위에 놓습니다. 테이블의 x, y 및 z 이동으로 단일 필라멘트 또는 필라멘트 번들을 조정합니다.
      메모: 3차원 배열로 인해 관련 섹션의 일부만 초점을 맞출 수 있습니다. 셀로판 호일을 사용하면 제한 없이 초점을 조정할 수 있습니다.
   4. 단일 필라멘트 또는 다발의 움직임을 관찰하십시오. 대물 렌즈가 액체에 닿지 않도록 하십시오. 표준 현미경 카메라로 필라멘트의 움직임을 기록합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
유리 제품, 다른
현미경 DM750	자이스
안구 카메라 MikrOkular Full HD	브레서		라즈베리 파이 미니컴퓨터와 결합된 타임랩스 녹화용
페트리 접시 폴리스티롤, 60mm x 15mm	머 크	P5481-500EA
소프트웨어, URL
이미지J		Immage 처리용 소프트웨어(픽셀 강도, 원 직경)
배양 배지
인공 해수	0.41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl, 2.4 mM NaHCO₃, 0.84 mM KBr, 0.49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 - 액체 매체	인공 해수, 0.1 % (v / v) 미량 원소 용액, 0.05 % (v / v) 비타민 용액, 0.88 mM NaNO₃, 36 μM NaH₂PO₄
미량 원소 솔루션	0.36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄, 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0.91 μM MnCl₂
비타민 용액	0.3 μM 티아민-HCl, 2.1 nM 비오틴, 0.37 nM 시아노코발라민