열 스트레스 쥐에서 Bacillus subtilis 의 효과를 평가하기 위한 조직학 및 혈액학적 분석

초록

출처: 소로쿨로바, I. 외. Bacillus subtilis 균주에 의한 쥐의 열 스트레스 부작용 예방. J. Vis. Exp. (2016)

이 영상은 열 스트레스에 노출된 쥐에서 Bacillus subtilis 의 보호 효과를 평가하기 위해 사용되는 조직학적 및 혈액 현미경 분석을 소개합니다.

프로토콜

1. 조직학적 분석

1. 각 실험용 쥐에서 소장 샘플을 외과적 절차로 채취합니다. 샘플을 부앵 고정제에 고정하고, 파라핀에 박힌 후 표준 절차에 따라 헤마톡실린과 에오신으로 6 μm 절편과 염색 단면을 준비합니다.
2. 각 샘플의 장 융모 높이와 점막 전체 두께를 측정하기 위해 고해상도 현미경 시스템을 사용하세요(배율 100배). 쥐 한 마리당 4개의 샘플을 분석하고 각 샘플마다 최소 20가지 측정을 하세요. Express 결과는 마이크로미터 단위입니다.

2. 혈액의 고해상도 광학 현미경

1. 진동 차단 플랫폼을 현미경 시스템, 비디오 카메라, 컴퓨터의 기반으로 사용하여 실시간 이미지를 기록하세요. 리처드슨 슬라이드를 사용해 테스트 이미지를 보정하세요.
2. 각 쥐에서 새로 채취한 7μl 혈액을 유리 슬라이드, 커버 슬립에 올려 사진 촬영 후 각 샘플에 72 × 53.3 μm² 크기의 이미지 프레임 10장(배율 1,700배)을 기록합니다.
3. 고해상도 직접 보기 광학 이미지를 실시간으로 제공하는 소프트웨어를 사용하여 소포 농도를 측정합니다. 각 실험 조건마다 최소 20개의 이미지 프레임을 검토합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인산염 완충 식염수 (PBS)	시그마-올드리치, 세인트루이스, 미주리	P4417
부앵의 고정제	전자현미경 과학, 펜실베이니아주 해트필드, 미국	15990
리처드슨 테스트 슬라이드	전자현미경 과학, 미국 펜실베이니아주 햇필드	80303
소니 DXC-33 비디오 카메라	소니
광학 현미경 광학 시스템	시토비바 테크놀로지컬 주식회사, 오번, AL
이미지-프로 플러스 소프트웨어	미디어 사이버네틱스, MD, 미국