주사기 기반 압력 방법을 이용한 부유성 박테리아 추출

Abstract

출처: Rufián, J. S. 외, 식물 조직 내 Pseudomonas 시링기 유전자 발현의 단세포 분석. J. Vis. 경험 (2022)

이 영상은 주사기 기반 압력 방법을 보여주며, 세포 세포 간 공간인 세포 간 공간인 아포플라스트에서 증식하여 미세군집을 형성하는 포포플라스틱 박테리아를 추출합니다. 이 방법은 단세포 분석에 적합한 잔해 없는 박테리아 샘플을 제공합니다.

Protocol

아포플라스트에서 박테리아 추출

1. 접종 4일 후, 애기장대 의 공중 부분이나 콩 식물의 접종된 잎을 잘라내어 바늘 없이 20mL 주사기에 넣습니다(그림 2G). 콩잎의 경우, 잎을 스스로 말아 아브릭 면을 바깥쪽으로 남겨두세요. 그림 2F에 표시되어 있습니다.
2. 조직을 덮을 만큼 충분한 양의 증류수를 추가하세요(보통 10-15mL).
3. 플런저를 삽입하고, 주사기를 수직으로 위치시키고 끝이 위를 향한 상태에서, 총열을 살짝 두드려 주사기 내부의 과도한 공기와 기포를 제거하여 모든 공기가 끝 근처에 집중되도록 합니다. 플런저를 밀어 공기를 빼세요. 주사기 내부에 공기가 최대한 적게 들어오면, 주사기 배럴 끝부분에 파라핀 필름을 덮습니다.
4. 플런저를 조심스럽게 눌러 조직이 더 어두워질 때까지 양압을 생성하세요(그림 1I 및 그림 2H). 그 후 플런저를 당겨 음압을 생성합니다(그림 1J와 그림 2I). 이 단계를 3-5번 반복하세요.
5. 파라핀 필름과 플런저를 제거하고, 그림 2J와 같이 아포플라스트로 추출된 박테리아가 포함된 액체를 수집합니다.

Results

그림 1: 애기장대를 이용한 박테리아 접종 및 아포플라스트 추출 . (A) 금속 망을 제대로 부착한 화분 준비. (B) (C)에 명시된 대로 이쑤시개로 씨앗을 뿌려 뿌리는 것. (D) 접종 준비가 된 애기장대.

Materials