액체 배지에서 순수 박테리아 배양 생성

초록

출처: Brumfield, K. D. 외, Vibrio 콜레라 의 생물형 유지 및 구별을 위한 임상 및 환경 분리 기법. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 액체 배지에서 박테리아 배양물을 성장시키는 과정을 보여줍니다. 흔들림은 통기를 촉진하고 영양분을 고르게 분배하여 기하급수적 성장을 지원하고, 하류 적용에 적합한 균일하고 대사적으로 활발한 현탁물을 만듭니다.

프로토콜

1. 비브리오 콜레라 균주의 유지 및 성장

1. 냉동 육즙 배양의 준비 및 사용
   1. 멸균된 2mL 마이크로원심분리관에서 원심분리(≥8,600 x g)로 1.8mL의 액체 펠릿을 2분간 하룻밤 배양하고, 상청액을 제거한 후 피펫팅으로 900 μL 신선한 루리아-베르타니(LB) 육수에 재현탁합니다.
   2. 배양액에 멸균 60%(v/v) 글리세롤 900 μL를 첨가하고 소용돌이로 혼합합니다.
   3. 혼합물을 멸균 2mL 냉동 튜브로 옮겨 -80 °C에서 무기한 보관합니다.
   4. 사용법은 멸균 접종 루프를 사용해 소량의 냉동 육즙을 제거하고, LB 한천 플레이트에 단일 콜로니를 스트릭합니다. 냉동 육즙은 사용 후 즉시 -80 °C로 다시 돌려 배양물이 완전히 해동되는 것을 방지하세요. 플레이트를 37°C에서 뚜껑 쪽이 아래로 향하게 하여 12시간에서 16시간 동안 배양합니다.
2. 액체 배지에서의 야간 배양 증식
   1. 냉동 육즙에서 LB 한천 플레이트로 단일 군집을 연속으로 추적합니다(1.1.4절에 따라). 플레이트를 37°C에서 뚜껑 쪽이 아래로 향하게 하여 12시간에서 16시간 동안 배양합니다.
   2. 멸균 어플리케이터 스틱으로 단일 콜로니 표면을 접촉하여 액체 육수에 옮겨 멸균 10mL 배양관에 액체 LB 육수 4mL를 접종합니다.
   3. 셰이커 인큐베이터에서 분당 225회전(rpm)으로 12시간에서 16시간 동안 37°C에서 12시간에서 16시간 동안 배양합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
60% 글리세롤	칼바이오케미	356352	http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade---CAS-56-81-5---Calbiochem,EMD_BIO-356352
아가르	벡토, 디킨슨 앤 컴퍼니	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
HCl	피셔 사이언티브	A144-212	부식성의; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID
르루프	디콘 랩스 주식회사	MP190-25	http://deconlabs.com/products/leloop/
Le stab	디콘 랩스 주식회사	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
나클	피셔 사이언티브	S271-10	https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID
페트리 접시 (100 mm x 15 mm)	피셔 사이언티브	FB0875712	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712
트립톤	벡토, 디킨슨 앤 컴퍼니	211705	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch
효모 추출물	벡토, 디킨슨 앤 컴퍼니	212750	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch