트리페닐테트라졸륨 염화를 이용한 콜레라 균주 비교를 위한 운동성 분석

초록

출처: 브럼필드, K. D. 외 비브리오 콜레라의 생물형 유지 및 구별을 위한 임상 및 환경 분리주. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 트리페닐테트라졸륨 클로라이드를 이용한 부드러운 한천 분석법을 시연하며, 활발히 이동하는 세포 주변의 적색 구역 형성을 통한 대사 활동을 시각화하여 비브리오 콜레라 균주의 운동성을 평가하고 비교합니다.

프로토콜

1. 운동성 검사
   1. 비 브리오 콜레라 균주를 액체 LB(루리아-베르타니) 육수에 하룻밤 배양해 준비하세요.
   2. 무균 2mL 마이크로 원심분리관에 원심분리하여 1.8mL 배양액 1.8mL를 2분간 펠릿(≥8,600 x g)으로 제거한 후 피펫으로 상정액을 제거합니다. 피펫팅으로 세포 펠릿을 1.8 mL 1x PBS(인산 완충 식염수)에 재현탁합니다.
   3. 세척 절차를 세 번 반복한 후 1.8 mL 1x PBS에 최종 재현탁합니다.
   4. 세척액 배양액에 접종용 찔러기를 삽입하고 배지에 수직으로 찌르는 방식으로 모틸리티 한천 플레이트를 접종합니다. 각 접종 사이에는 분젠 버너로 철사 고정부를 멸균하고, 한천을 찌를 때는 접종 부위가 휘지 않도록 주의하세요. 접종 부위가 휘지 않도록 주의하세요. 이는 결과에 영향을 줄 수 있습니다.
   5. 플레이트는 뚜껑 쪽이 위로 향해 37°C에서 14시간에서 24시간 동안 배양합니다. 14시간 후에는 배양 과잉 증식을 방지하기 위해 운동성 플레이트를 면밀히 관찰하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아가르	벡토, 디킨슨 앤 컴퍼니	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
벤치탑 원심분리기	에펜도르프	5424	1.5ml 에펜도르프 튜브용 원심분리기
르 스탭	디콘 랩스 주식회사	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
LB 육수 (밀러)	열모/깁코	10855021	정적 박테리아 배양 및 OD 측정을 위한
페트리 접시 (150 mm x 15 mm)	피셔 사이언티브	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID
PBS 1x			정적 박테리아 배양 및 OD 측정을 위한
트리페닐테트라졸륨 클로라이드	알파 에이사르	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/