마이크로플레이트 리더를 이용한 세균 성장의 정밀하고 고처리량 분석

Abstract

출처: Kurokawa, M. 외. 세균 성장의 정밀하고 고처리량 분석. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 마이크로플레이트 리더를 이용한 박테리아 성장의 고처리량 정량을 시연합니다. 배양 준비, 광학 밀도 측정, 성장 역학 분석에 포함된 단계를 개괄합니다.

Protocol

1. 성장 실시간 기록
   1. 96웰 플레이트 픽토그램(8 × 12 표)을 그려 접종된 배양 샘플의 위치를 표시합니다. 표를 출력해서 실험 참고 자료로 사용하세요.
      메모: 마이크로플레이트 가장자리에 위치한 웰은 증발 때문에 블랭크 매개체만 포함해야 합니다.
   2. 멸균된 96웰 평평바닥 마이크로플레이트(뚜껑), P-1000, 1000 μL 피펫 팁, P-200 200 μL 피펫 팁, 여러 개의 1.5 mL 마이크로튜브, 8 멀티채널 피펫, 멸균 시약 저장소, 상온 M63, 그리고 대장균 글리세롤 스톡을 깨끗한 작업대 위에 놓습니다.
   3. 약 25mL M63을 시약 저장소에 첨가합니다. 이 저수지 스톡을 사용하여 다음 모든 단계를 수행하세요.
   4. 연속 희석을 준비하기 위해 마이크로튜브에 900 μL M63을 추가합니다.
   5. 글리세롤 스톡을 실온에서 해동하세요. 녹인 글리세롤 스톡에 900 μL M63을 추가하고 소용돌이로 돌립니다. 이로 인해 원래 글리세롤 재고의 10배 희석됩니다.
   6. 10배 희석액 중 100 μL을 900 μL M63과 소용돌이가 들어 있는 다른 마이크로튜브에 옮깁니다. 이로 인해 100배 희석됩니다.
   7. 원하는 희석 횟수가 달성될 때까지 1.6단계를 반복합니다.
   8. 8채널 피펫(P-200)을 사용해 마이크로플레이트 가장자리의 웰에 200 μL M63을 채웁니다.
      메모: 이 우물들은 빈 공간으로 사용할 수 있습니다.
   9. 기준표(Step 1.1)에 따라 1.4-1.7단계에 걸쳐 준비한 희석된 샘플당 200 μL를 마이크로플레이트 웰에 적재합니다. 희석된 샘플을 적재 전에 소용돌이로 변환하고, 같은 샘플을 플레이트의 다양한 위치에 여러 웰에 적재합니다.
   10. 96웰 마이크로플레이트를 플레이트 리더기에 올려놓으세요.
   11. "작업 관리자"에서 "지금 읽기"를 열고 프로그램을 선택하세요. "확인"을 클릭하면 측정을 시작하세요. 녹음을 데이터 분석을 위한 새로운 실험 파일로 저장하세요.

Materials