마이크로플레이트 리더를 이용한 세균 성장의 정밀하고 고처리량 분석

초록

출처: Kurokawa, M. 외. 세균 성장의 정밀하고 고처리량 분석. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 마이크로플레이트 리더를 이용한 박테리아 성장의 고처리량 정량을 시연합니다. 배양 준비, 광학 밀도 측정, 성장 역학 분석에 포함된 단계를 개괄합니다.

프로토콜

1. 성장 실시간 기록
   1. 96웰 플레이트 픽토그램(8 × 12 표)을 그려 접종된 배양 샘플의 위치를 표시합니다. 표를 출력해서 실험 참고 자료로 사용하세요.
      메모: 마이크로플레이트 가장자리에 위치한 웰은 증발 때문에 블랭크 매개체만 포함해야 합니다.
   2. 멸균된 96웰 평평바닥 마이크로플레이트(뚜껑), P-1000, 1000 μL 피펫 팁, P-200 200 μL 피펫 팁, 여러 개의 1.5 mL 마이크로튜브, 8 멀티채널 피펫, 멸균 시약 저장소, 상온 M63, 그리고 대장균 글리세롤 스톡을 깨끗한 작업대 위에 놓습니다.
   3. 약 25mL M63을 시약 저장소에 첨가합니다. 이 저수지 스톡을 사용하여 다음 모든 단계를 수행하세요.
   4. 연속 희석을 준비하기 위해 마이크로튜브에 900 μL M63을 추가합니다.
   5. 글리세롤 스톡을 실온에서 해동하세요. 녹인 글리세롤 스톡에 900 μL M63을 추가하고 소용돌이로 돌립니다. 이로 인해 원래 글리세롤 재고의 10배 희석됩니다.
   6. 10배 희석액 중 100 μL을 900 μL M63과 소용돌이가 들어 있는 다른 마이크로튜브에 옮깁니다. 이로 인해 100배 희석됩니다.
   7. 원하는 희석 횟수가 달성될 때까지 1.6단계를 반복합니다.
   8. 8채널 피펫(P-200)을 사용해 마이크로플레이트 가장자리의 웰에 200 μL M63을 채웁니다.
      메모: 이 우물들은 빈 공간으로 사용할 수 있습니다.
   9. 기준표(Step 1.1)에 따라 1.4-1.7단계에 걸쳐 준비한 희석된 샘플당 200 μL를 마이크로플레이트 웰에 적재합니다. 희석된 샘플을 적재 전에 소용돌이로 변환하고, 같은 샘플을 플레이트의 다양한 위치에 여러 웰에 적재합니다.
   10. 96웰 마이크로플레이트를 플레이트 리더기에 올려놓으세요.
   11. "작업 관리자"에서 "지금 읽기"를 열고 프로그램을 선택하세요. "확인"을 클릭하면 측정을 시작하세요. 녹음을 데이터 분석을 위한 새로운 실험 파일로 저장하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인산이칼륨	와코	164-04295
인산단칼륨	와코	166-04255
황산암모늄	와코	019-03435
황산마그네슘 헵타하이드레이트	와코	138-00415
티아민-HCl	와코	201-00852
포도당	와코	049-31165
HCl	와코	080-01066
황산철(II) 헵타하이드레이트	와코	094-01082
코	와코	168-21815
글리세롤	와코	075-00611
피펫 팁, 200 μL	왓슨	110-705Y
피펫 팁, 1,000 μL	왓슨	110-8040
마이크로튜브 (1.5 mL)	왓슨	131-715C
8 멀티채널 피펫	왓슨	NT-8200
파소리나 젓는 자	하나로,	2-4990-02
유리 실린더 (200 mL)	하나로,	1-8562-07
정밀 pH 측정기	하나로,	AS800 / 1-054-01
피펫만 P-200	길슨	1-6855-05
피펫만 P-1000	길슨	1-6855-06
마이크로튜브 스탠드	BM 약력	801-02Y
소용돌이	BM 약력	BM-V1
Corning Costar 96웰 마이크로플레이트 뚜껑 포함 (평평한 바닥, 투명)	시그마-올드리치	코닝, 3370년
코닝 코스타 시약 저장소 (50 mL)	시그마-올드리치	코닝, 4870년
EPOCH2	바이오텍	2014-EP2-002 / EPOCH2T
바이오 클린 벤치	파나소닉	MCV-B131F
박테리아 균주	스트레인 뱅크 조직; 일본 국가생물자원사업(NBRP)