1. 유전체 DNA의 박테리아 배양 및 추출<ol><li>Y . ruckeri 순수 배양물을 적합한 한천 종류에 파종하고(저자는 5% 소 혈액 한천을 사용), 22°C에서 1-2일, 15°C에서 3-4일간 배큐합니다.</li><li>각 한천 플레이트에서 단일 대표 군집을 선별하고 접종 루프를 사용하여 50 μL의 초정제수가 담긴 1.5mL 원심분리관으로 옮깁니다. 잠시 소용돌이를 돌린 후 100°C의 가열 블록에서 7분간 부화시킵니다.</li><li>16,000 x g 에서 3분간 원심분리한 후, 피펫을 사용해 상원액을 빈 1.5mL 원심분리관에 조심스럽게 옮깁니다. 다음 단계로 넘어가세요. 상청액을 템플릿 DNA로 사용하거나 -20°C에서 보관하세요.</li></ol>

<figure class='table'><table class='ck-table-resized'><colgroup><col style='width:25%;'><col style='width:25%;'><col style='width:25%;'><col style='width:25%;'></colgroup><tbody><tr><td>인큐베이터 22°C/15°C</td><td>선호하는 대로.</td><td>NA</td><td> </td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>선호하는 대로.</td><td>NA</td><td> </td></tr><tr><td>에펜도르프 세이프락 튜브, 1.5 mL</td><td>에펜도르프</td><td>30120086</td><td>DNA 추출 중에 사용된 원심분리기 튜브.</td></tr><tr><td>냉장고</td><td>선호하는 대로.</td><td>NA</td><td> </td></tr><tr><td>가열 블록</td><td>선호하는 대로.</td><td>NA</td><td> </td></tr><tr><td>밀리-Q 물</td><td>NA</td><td>NA</td><td>PCR 및 모세관 전기영동 중에 사용되는 정제수. 표준 레시피; 자체 제작.</td></tr><tr><td>예르시니아 루케리의 순수 배양</td><td>NA</td><td>NA</td><td>예를 들어, 냉동 보존 또는 신선한 상태.</td></tr><tr><td>보텍서</td><td>선호하는 대로.</td><td>NA</td><td> </td></tr></tbody></table></figure>

병원성 박테리아로부터 열 용해 기반 유전체 dna 추출

출처: <a href='https://app.jove.com/v/59455/multi-locus-variable-number-tandem-repeat-analysis-fish-pathogenic'>굴라, S. 외. 다중성 PCR 및 모세관 전기영동을 이용한 어류 병원성 박테리아 Yersinia ruckeri 의 다중 좌위 변수 연합 반복 분석. J. Vis. 경험 (2019).</a>이 프로토콜은 고립된 집락을 초순수수에 부탁하고 열을 가해 세포를 용해하여 Yersinia ruckeri 에서 유전체 DNA를 추출합니다. 원심분리는 DNA 함유 상청액을 세포 잔해에서 분리하여 PCR 기반 유전체형 분석과 역학 분석에 적합한 주형 DNA를 생성합니다.

병원성 박테리아로부터 열 용해 기반 유전체 DNA 추출

Source: Gulla, S., et al. Multi-locus Variable-number Tandem-repeat Analysis of the Fish-pathogenic Bacterium Yersinia ruckeri by Multiplex PCR and ...

영양분이 풍부한 한천 배지에서 병원성 박테리아 군락을 키우는 것부터 시작하세요.유전적으로 균일한 박테리아 세포 집단을 보장하고 유전자형 분석 중 변이성을 줄이기 위해 단일 콜로니를 선택하세요.멸균 접종 루프를 사용하여 선택된 군락을 초순수수에 옮겨 샘플에 오염물질 유입 위험을 최소화합니다.현탁 소용돌이를 통해 집단을 깨뜨리고 박테리아 세포를 균일하게 분산시킵니다.다음으로, 현탁액을 가열하여 박테리아 세포 외피를 파괴하는데, 이 외막은 펩티도글리칸 층, 내막으로 구성되어 있습니다.이로 인해 박테리아 세포는 세포 내 내용물을 분해하여 유전체 DNA를 포함한 물을 방출합니다.세포 잔해를 유전체 DNA에서 분리하기 위해 고속으로 원심분리합니다.상정액을 새 튜브로 옮겨 후속 유전자형 분석에 사용하세요.우선, 멸균 접종 루프를 사용해 페트리 접시에 적합한 한천 종류에 Yersinia ruckeri 순수 배양물을 파종하세요. 22도에서 1일에서 이틀 또는 15도에서 3에서 4일간 배양합니다. 그 후 접종 루프를 사용해 각 페트리 접시에서 대표적인 군락 하나를 하나 골라 1.5밀리리터 원심분리관에 50마이크로리터의 초정제수를 담아 재현탁합니다.소용돌이를 잠시 100도 섭씨의 가열 블록 위에서 7분간 부화시킵니다. 그 후 16,000g에서 3분간 원심분리 기를 하고, 피펫을 사용해 상정액 템플릿 DNA를 빈 1.5밀리리터 원심분리관에 조심스럽게 옮깁니다. 다음 단계로 진행하거나 DNA를 영하 20도에 보관하세요.

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분리 및 분획 기술

Thermal Lysis-Based Genomic DNA Extraction from a Pathogenic Bacterium

638 조회수. 영양분이 풍부한 한천 배지에서 병원성 박테리아 군락을 키우는 것부터 시작하세요.유전적으로 균일한 박테리아 세포 집단을 보장하고 유전자형 분석 중 변이성을 줄이기 위해 단일 콜로니를 선택하세요.멸균 접종 루프를 사용하여 선택된 군락을 초순수수에 옮겨 샘플에 오염물질 유입 위험을 최소화합니다.현탁 소용돌이를 통해 집단을 깨뜨리고 박테리아 ...

병원성 박테리아로부터 열 용해 기반 유전체 DNA 추출

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이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인큐베이터 22°C/15°C	선호하는 대로.	NA
원심분리기	선호하는 대로.	NA
에펜도르프 세이프락 튜브, 1.5 mL	에펜도르프	30120086	DNA 추출 중에 사용된 원심분리기 튜브.
냉장고	선호하는 대로.	NA
가열 블록	선호하는 대로.	NA
밀리-Q 물	NA	NA	PCR 및 모세관 전기영동 중에 사용되는 정제수. 표준 레시피; 자체 제작.
예르시니아 루케리의 순수 배양	NA	NA	예를 들어, 냉동 보존 또는 신선한 상태.
보텍서	선호하는 대로.	NA