합성 구강 박테리아 군집을 소화의 시뮬레이션 단계에 노출시키기

초록

출처: Arroyo, M. C. 외 시험 관 내 숙주-미생물 인터페이스에서 합성 박테리아 컨소시엄의 생존 가능성 평가. J. Vis. 경험 (2018)

이 영상은 모의 구강, 위장, 장 소화 과정에서 합성 구강 미생물 군집의 생존 가능성 평가를 시연합니다. 각 단계 후 세균 생존율이 수치화되며, 소화 스트레스로 인한 점진적인 감소가 나타납니다.

프로토콜

1. 시험관 내 위장 통과 조건 이후의 박테리아 생존

메모: 아래에 설명된 수정 사항을 적용해 모의 소화액을 준비하세요. 모든 희석물을 초순수수로 준비하세요. 0.22 μm 필터를 통해 모든 용액을 필터 멸균하고 멸균 조건에서 소화 절차를 수행합니다.

1. 구강 소화:
   1. 박테리아 군집 3mL를 50mL 멸균관에 넣고, 3mL의 모조 타액액(SSF)과 혼합합니다. SSF는 밀리몰/리터(mmol L⁻¹) 함량입니다: 염화칼륨(KCl) 15.1; 인산칼륨(KH₂PO₄) 3.7; 중탄산나트륨(NaHCO₃), 6.8; 염화마그네슘 육수화물(MgCl₂·6H₂O), 0.5, 탄산암모늄[(NH₄)₂CO₃], 0.06; 염산(HCl) 1.1; 염화칼슘 이하이드레이트(CaCl₂·2H₂O), 0.75. 인간 타액 IX-A형에서 나온 α-아밀라아제 75 U/mL와 돼지 위(유형 II)에서 얻은 2 g/L 점액을 SSF에 추가합니다.
   2. 혼합물을 37°C, 100rpm에서 2분간 배양하세요. DNA 추출 및 유세포분석 정량(S1)을 위해 2mL 샘플을 채취합니다.

2. 위 소화:

1. 4mL의 모의 위액(SGF)을 추가하면, (mmol L-1 기준): KCl, 6.9; KH₂PO₄, 0.9; NaHCO₃, 25; 염화나트륨(NaCl) 47.2; MgCl₂·6H₂O, 0.1, (NH₄)₂CO₃, 0.5; HCl은 15.6; CaCl₂·2H₂O, 0.075. 또한 SGF에는 돼지 위(Type II)에서 추출한 2g/L의 점액이 포함되어 있었습니다.
2. 필요하다면 pH를 측정하고 1몰(1 M) HCl을 사용해 pH 3으로 조정하세요. 37°C, 100rpm에서 인큐베이팅하세요. 2 mL 샘플(S2)을 채취하세요.

3. 소장 소화:

1. 4mL의 모의 장액(SIF)을 추가하면(mmol L-1 기준): KCl, 6.8; KH₂PO₄, 0.8; NaHCO₃, 85석; NaCl, 38.4; MgCl₂·6H₂O, 0.33; HCl은 8.4; CaCl₂·2H₂O, 0.3, 소화관에 투여.
2. 필요하다면 pH 7에 1M 수산화나트륨(NaOH)을 넣어 조절하세요. 37°C, 100rpm에서 인큐베이팅하세요. 2 mL 샘플(S3)을 채취하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
돼지 위장 II형 뮤신	시그마-올드리치	M2378
PBS	깁코	14190250
밀리포어 밀리-Q 학술용 초순수 시스템	밀리포어, 메르크 KGaA	-
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