이 프로토콜은 고립된 집락을 초순수수에 부탁하고 열을 가해 세포를 용해하여 Yersinia ruckeri 에서 유전체 DNA를 추출합니다. 원심분리는 DNA 함유 상청액을 세포 잔해에서 분리하여 PCR 기반 유전체형 분석과 역학 분석에 적합한 주형 DNA를 생성합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
병원성 박테리아에 감염된 식물 잎 조직에서 유전체 DNA 추출
644 조회수
⸱
2025년 11월 28일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 유전체 DNA의 박테리아 배양 및 추출
- Y . ruckeri 순수 배양물을 적합한 한천 종류에 파종하고(저자는 5% 소 혈액 한천을 사용), 22°C에서 1-2일, 15°C에서 3-4일간 배큐합니다.
- 각 한천 플레이트에서 단일 대표 군집을 선별하고 접종 루프를 사용하여 50 μL의 초정제수가 담긴 1.5mL 원심분리관으로 옮깁니다. 잠시 소용돌이를 돌린 후 100°C의 가열 블록에서 7분간 부화시킵니다.
- 16,000 x g 에서 3분간 원심분리한 후, 피펫을 사용해 상원액을 빈 1.5mL 원심분리관에 조심스럽게 옮깁니다. 다음 단계로 넘어가세요. 상청액을 템플릿 DNA로 사용하거나 -20°C에서 보관하세요.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 위저드 유전체 DNA 정화 키트 | 프로메가 | A1120 | 핵 용해, RNase, 단백질 침전, DNA 재수화 용액의 원천 |
| 액체 질소 | 에어 프로덕츠 | 해당 없음 | |
| 마스터사이클러 프로와 제어판 | 에펜도르프 | 6321000019 | |
| 1250W 전자레인지 | 파나소닉 | 해당 없음 | |
| 5424 탁상용 원심분리기 | 에펜도르프 | 05-403-93 | |
| Isotemp 215 디지털 워터 배스 | 피셔 사이언티픽 | 15-462-15Q | |
| 금속 주걱 | 시그마-올드리치 | Z283274 | |
| 절구와 절구 | 시그마-올드리치 | Z247464 | |
| LSE 보텍스 믹서 | 코 닝 | 6775 | |
| 2-프로판올 | 시그마-올드리치 | 19516 | |
| 멸균 10 μL 팁 | 팁원 | 1161-3730 | |
| 멸균 200 μL 팁 | 팁원 | 1163-1730 | |
| 멸균 1250 μL 팁 | 팁원 | 1161-1750 | |
| 가변 용량 피펫터 키트 | VWR | 75788-460 | |
| 에티듐 브로마이드 | 시그마-올드리치 | E1510 | |
| 아가로스 | IBI 사이언티픽 | IB70041 | |
| EDTA | 써모피셔 사이언티브 | 17892 | |
| 아세트산 | 피셔 케미컬 | A38-212 | |
| 트리스 베이스 | 시그마-올드리치 | 10708976001 | |
| 뮤큐벳 | 에펜도르프 | 6138000018 | |
| 바이오스펙트로미터 기본 | 에펜도르프 | 6135000009 |
