타임랩스 현미경을 이용한 박테리아의 생물학적 잡음 연속 모니터링

초록

출처: 차이모비츠, E. A. 외 타임랩스 현미경을 이용한 대장 균의 생물학적 잡음 연속 측정. J. Vis. 경험 (2021)

이 영상은 타임랩스 현미경을 이용해 박테리아의 성장 및 분열 과정에서 GFP 형광의 변동을 추적하여 대장균 의 생물학적 잡음을 실시간으로 시각화하는 과정을 보여줍니다.

프로토콜

1. 현미경 영상 촬영을 위한 샘플 준비
   1. 플라스크를 물욕에서 꺼내세요. 플라스크 외부를 깨끗이 닦고 실온(25°C)까지 식히세요.
      메모: 타이머가 끝나기 약 3분 전에 플라스크를 제거하세요.
   2. 젤 3mL를 원을 그리며 플레이트 둘레에 지속적으로 붓습니다. 몇 분간 굳히도록 두세요.
   3. 플레이트를 테이프로 밀봉하고 25G 바늘로 여러 구멍을 뚫으세요. 모든 접시를 뒤집어 젤에 물이 떨어지지 않도록 하세요.
   4. 모든 접시를 4°C에서 30분간 부양하여 세포 유사분열을 방지하면서 완전히 고체될 수 있도록 하세요.
      메모: 샘플은 4°C에 두고 연속 측정을 위해 하루를 넘지 않도록 하세요.
   5. 제조사 지침에 따라 현미경을 시작하세요.
   6. 가장 낮은 증폭 렌즈로 초기 초점을 찾고 자동 초점 시스템(AFS)을 작동시킵니다.
   7. 필요하면 오일을 사용하고, 렌즈에 오일을 적셔서 플랫폼 컨트롤러로 플레이트를 조심스럽게 펴서 바르세요(수동으로 하는 게 아니라). 그러면 AFS를 다시 작동시킬 수 있습니다.
   8. Z 단계 단면의 기본 제안에 따라 Z 방향의 상대 단면을 사용하세요.
      메모: 밝은 시야 이미지를 5분마다 찍고, 형광등 이미지를 20분마다 찍으세요. 처음 30분 동안 초점을 조정해야 할 때도 있습니다. 현미경 인큐베이터 박스와 오일을 예열한 후 샘플을 냉장 보관하면 초기 초점 손실을 줄이는 데 도움이 됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
35mm 유리 접시	매텍	P35G-0.170-14-C	두께는 현미경 렌즈에 해당합니다.
아가로스	론자	5004	LB 준비
이클립스 Ti	니콘		역현미경
이머솔 518F	자이스	4449600000000	침수 오일
파라필름 테이프	베미스	PM-996	본문에서는 테이프로 불림