글리세롤 또는 디메틸 설폭사이드를 이용한 시아노박테리아 균주의 장기 냉동 보존

초록

출처: 리아-스미스, D. J. 외 모델 남세균 종에서 표지 및 표지 없는 돌연변이체 생성. J. Vis. 경험 (2016)

이 영상은 농축된 세포 현탁액을 글리세롤 또는 DMSO와 결합하여 저온에 저장하여 시아노박테리아 균주를 냉동 보존하는 과정을 시연하며, 광합성과 유전 연구를 위한 생존 가능한 배양물을 장기 유지할 수 있게 합니다.

프로토콜

1. 배양 매체 준비

1. BG11 미디엄 준비하세요
   1. 100배 BG11, 미량 원소, 철 원소를 혼합한 스톡 용액을 준비합니다(표 1).
   2. 인산염 스톡, 탄산나트륨(Na₂CO₃), 스톡 N-[트리스(하이드록시메틸)메틸] -2-아미노에탄설폰산(TES) 버퍼, 그리고 중탄산나트륨(NaHCO₃)을 각각 별도의 용액으로 준비합니다(표 1).
   3. 인산염과 Na_2CO3 스톡을 오토클레이브합니다. 0.2 μm 필터로 TES 버퍼와 NaHCO₃를 필터 멸균합니다.
   4. BG11을 물 976ml, 100x BG11 10ml, 미량 원소 1ml, 철 스톡 1ml를 섞어 오토클레이브하여 준비합니다. 이 용액이 실온에 식은 후에는 인산염 스톡 1ml, Na_2CO3 스톡 1ml, NaHCO₃ 10ml를 추가합니다.
   5. BG11 고체 배지의 경우, 플라스크 한 개에 한천 15g과 물 700ml를 넣으세요. 두 번째 플라스크에 티오황산나트륨 3g(Na₂S_....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
나노₃	시그마	S5506
MgSO₄·7H₂O	시그마	230391
CaCl₂	시그마	C1016
구연산	시그마	C0759
Na₂EDTA	어부	EDT002
H₃BO₃	시그마	339067
MnCl₂·4H₂O	시그마	M3634
ZnSO₄·7H₂O	시그마	Z4750
Na₂MoO₄·2H₂O	시그마	331058
CuSO₄·5H₂O	시그마	209198
Co(NO₃)₂·6H₂O	시그마	239267
페릭 암모늄 시트레이트	시그마	F5879
K₂HPO	시그마	P3786
Na₂CO₃	어부	SODC001
오 셨	시그마	T1375
NaHCO₃	어부	SODH001
젠장	시그마	H3375
시아노코발라민	시그마	47869
Na₂S₂O₃	시그마	72049
백토 한천	BD	214010
자당	어부	SUC001
페트리 접시 90mm 삼중 통풍	그라이너	633185
0.2 μm 필터	사르토리우스	16534
100ml 원뿔형 플라스크	파이렉스	CON004
파라필름 M 100mm x 38m	베미스	FIL003
푸전 고충실도 DNA 중합효소	퓨전	F-530
아가로스	멜포드	MB1200
DNA 정제 키트	모비오	12100-300
제한 엔도뉴클레아제	NEB
T4 리가제	써모 사이언티픽	EL0011
루리아 베르타니 육수	인비트로젠	12795-027
MES	시그마	M8250
카나마이신 황산염	시그마	60615
암피실린	시그마	A9518
GeneJET 플라스미드 미니프렙 키트	써모 사이언티픽	K0503
14ml 둥근 바닥 튜브	BD 팔콘	352059
고탁 G2 플렉시 DNA 중합효소	프로메가	M7805
425-600 μm 유리 구슬	시그마	G8772
글리세롤	시그마	G5516
DMSO	시그마	D8418
형광등	그로-럭스	69
HT 멀티트론 광생물반응기	인포