공동 배양에서 미생물 상호작용을 연구하기 위한 시험관 내 분석법

초록

출처: 템킨, M. I. 외 미생물 상호작용 연구를 위한 고처리량 공동 배양 분석법. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 코리네박테리움 프로핀쿰과 포도상구균 간의 미생물 상호작용을 연구하기 위한 시험관 내 검사를 시연합니다.

프로토콜

1. 표적 생물 접종

참고: 하룻밤 배양 후에는 배양물이 탁한지 확인하세요. 일부 박테리아 배양은 배양관 바닥에서 응집될 수 있습니다. 배양관을 보류시켜 덩어리를 분산시키고 배양 탁도를 평가합니다.

1. 빈 12웰 플레이트의 각 웰에 뇌심장 주입(BHI) 육수 1.8mL와 200 μL 표적 배양액을 채워 표적 플레이트를 준비합니다.
   참고: 표적 유기체란 동배양 상호작용 분석법을 통해 억제 상태가 결정된 유기체를 의미합니다. 이 실험의 목표 생물은 인간의 비강 세척 샘플에서 분리한 포도상구균 속입니다.
2. 포장을 풀어 멸균 접종 도장을 표적 플레이트에 붙이세요. 우물 안에서 배양물을 부드럽게 휘저으며, 이웃 우물과 교차하지 않도록 주의하세요.
3. 접종 도장을 들어 올리고 각 도장 끝에 희석된 표적 배양액 방울이 있는지 확인하세요.
4. 접종 스탬프를 접종되지 않은 바이오아세이 플레이트 위에 올려놓고 스탬프를 부드럽게 흔들어 각 웰에 접종을 넣어 단일배양 통제판을 준비합니다. 접종 스탬프가 제거되면 바이오애세이 플레이트의 웰에 배양 방울이 보여야 합니다.
   1. 만약 매지 농도가 고르지 않아 접종 스탬프가 부착되지 않은 웰이 있다면, 피펫을 사용해 웰 오른쪽에 3μL 희석된 하룻밤 배양액을 포착합니다.
5. 위에서 했던 대로 바이오아세이 플레이트에 접종을 하되(1.4.1 단계 참조), 스탬프를 12웰 플레이트의 오른쪽과 팁이 맞도록 정렬하세요. 우물 접종 시 스탬프가 기존 박테리아 집단에 닿지 않도록 주의하세요.
6. 조심스럽게 도장을 떼어내 다시 표적 판에 넣으세요.
7. 모든 판에 접종이 완료될 때까지 각 바이오아세이 플레이트에 대해 접종을 반복합니다.
8. 적절한 온도에서 생물분석판을 거꾸로 7일간 배양합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
12웰 세포 배양판, 뚜껑 부착 멸균	그레이너 바이오-원	665 180
한천, 세균학	VWR	J637
브레인 하트 주입 육수	닷 사이언티픽	DSB11000-5000