모기 형질전환 탈이온수로 1령 Aedes albopictus 유충 10마리를 3회 세척한 다음, 유충을 탈이온수 95 mL가 담긴 비커로 옮깁니다. 재조합 Aedes aegypti densovirus (rAaeDV) 스톡 5 mL(최종 농도 1.0 x 10¹⁰ copies/mL)를 첨가합니다. 28 °C에서 24시간 동안 배양하고, 유충을 탈이온수로 3회 세척한 후 다시 플레이트로 옮겨 정기적으로 먹이를 공급합니다. qPCR 또는 Western blot을 통해 유충의 표적 유전자 발현 수준을 모니터링합니다. 참고: 형광 신호 검출 방법을 사용하면 감염된 유충을 더 정밀하게 분리할 수 있습니다. 예를 들어, DsRed를 발현하는 재조합 바이러스에 감염된 유충의 형광 신호를 검출하려면, 유충을 오목 슬라이드 글라스 위에 놓고 감염 후 2일까지 8시간마다 도립 형광 현미경으로 관찰할 수 있습니다. 형광을 띠는 유충이 발견되면, 이후 지속적인 관찰이 가능하도록 개별 플라스틱 테스트 컵에 분리해야 합니다. 이 방법을 통해 여러 조직이 감염된 유충을 식별할 수 있습니다. Liu, P., 외 등모기 유충의 유전자 기능 분석을 위한 유전자 전달 벡터로서의 재조합 모기 덴소바이러스 활용. J. Vis. Exp. (2017)
본 영상에서는 microRNA를 인코딩하는 재조합 모기 덴소바이러스를 사용하여 모기 유충의 특정 유전자를 억제하는 방법을 보여줍니다. 감염된 초기령 유충은 기능적인 microRNA를 생성하여 후속 연구를 위한 표적 유전자 발현을 억제합니다.
