간 모델의 형질도입 인산염 완충 식염수(PBS)를 해당 부피만큼 첨가하여 아데노 부속 바이러스(AAV) 벡터 용액의 최종 농도를 5ml 당 2.7 x 10¹³ 벡터 게놈으로 조정한다. 캐뉼라에서 튜브를 제거하여 간을 배지 회로에서 분리한다. 간문맥의 캐뉼라에 5ml 주사기를 연결하고 AAV 벡터 용액 전체(5ml)를 주입한다. 참고: 선택 사항으로, 간 전체에 걸친 AAV 벡터 용액의 분포를 확인하기 위해 페놀 레드(5 µg/ml)를 첨가한다. 펌프 작동 없이 1시간 동안 배양한다. 유량을 점진적으로 증가시키는데, 1.25 ml/min으로 10분, 2.5 ml/min으로 20분, 3.75 ml/min으로 30분 동안 설정한다. 재세포화된 쥐 간을 6일 동안 배양한다. 참고: 이틀마다 배지의 1/3을 신선한 배지(50ml)로 교체한다. 배양 배지를 채취하여 젖산 탈수소효소 활성, 배지 시료의 pH, 포도당 및 젖산 농도와 같은 생리학적 파라미터를 측정한다. Hiller, T., 외 등인간 간세포암 세포주 HepG2로 재구성된 3차원 간 모델에서의 바이러스 벡터 연구. J. Vis. Exp., (2016)
이 영상에서는 인간화된 쥐 간 지지체 내에서 아데노 부속 바이러스(adeno-associated virus) 매개 유전자 전달 과정을 보여줍니다. 벡터는 수용체 매개 엔도시토시스를 통해 형광 리포터와 유전자 침묵 RNA를 인코딩하는 외래유전자를 간세포 내로 전달합니다. 이 모델은 관류형 3D 간 조직 시스템에서 효율적인 형질전환을 지원합니다.
