동물 모델을 이용한 모든 절차는 해당 기관의 동물 실험 윤리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회의 심의를 거쳤습니다. 1. γHV68 감염 마우스의 ELISA를 이용한 사이토카인 분비 측정 성별이 일치하는 6-8주령 C57BL/6 (B6) 형제 마우스(그룹당 8-12마리)를 케타민 1.5 mg/자일라진 0.12 mg을 복강 내 주사하여 마취시키고, 40 µl에 40 PFU(플라크 형성 단위)의 γHV68을 비강 내로 접종합니다. 감염 후 서로 다른 시점에서 CO2 흡입 후 경추 탈구를 통해 마우스를 안락사시킵니다. 흉골을 따라 왼쪽 측면을 절개하여 가슴을 열고, 날카로운 가위로 갈비뼈를 절단합니다. 폐 조직을 수집합니다. 500 µl의 1.0 mm 지르코니아/실리카 비즈가 들어 있는 멸균된 1.5 ml 스크류 캡 튜브에 폐 조직의 절반(좌엽)을 수집합니다. 튜브에 차가운 무혈청 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 1 ml를 넣고 비드 비팅(bead-beating)으로 30초 동안 폐 조직을 균질화합니다. 튜브를 얼음 위에 2분간 두어 냉각시킨 후 이 과정을 한 번 더 반복합니다. 튜브를 4 °C에서 10분 동안 15,000 x g로 원심 분리하고, 상층액을 수집하여 아래에 설명된 대로 사이토카인 생성을 측정합니다. 제조사의 지침에 따라 상용 사이토카인 ELISA(효소 결합 면역 흡착 분석) 키트를 사용하여 사이토카인을 측정합니다. Zhang, J., 외. P. 사이토카인 생성의 바이러스 회피에 있어서 선천성 면역 신호 전달의 분석. J. Vis. Exp. (2014)
본 영상에서는 폐 특이적 면역 반응을 유도하기 위해 마우스에 마우스 헤르페스 바이러스를 비강 내로 투여하는 방법을 보여줍니다. 이후 폐 조직을 처리하여 호스트 면역 반응의 후속 평가를 위한 사이토카인 함유 상층액을 얻습니다.
