Drosophila melanogaster의 testes 신속하게하고 효율적으로 해부 바늘을 사용하여 성인 남성에서 격리 수 있습니다. 연습, 하나는 쉽게 하나 또는 두 일 이내에 항체 또는 효소 기반 assays 높은 처리량 시퀀싱 이상의 전통적인 분자 생물학의 방법으로 DNA 또는 RNA의 분석 또는 단백질의 충분한 testes의 양을 분리 수 있습니다.
이 논문에서
요약
초록
Drosophila melanogaster의 testes은 줄기 세포 유지 보수 및 차별화, 감수 분열, 그리고 소마 germline 상호 작용 연구를위한 중요한 모델을 제공합니다. Testes는 일반적으로 0-3일 pupal 사건에서 eclosion 후 성인 남성으로부터 격리됩니다. 야생 형 파리의 testes 쉽게 그들이 노란색이기 때문에 다른 조직의 구별하지만 흰색 돌연변이 파리의 testes은 실험실 실험에 대한 일반적인 유전적 배경은 파리 창자로 모양과 색상이 모두 비슷합니다. 검은 배경과 유리 현미경 슬라이드에 절개를 수행하면 상당히 쉽게 testes을 식별합니다. Testes는 해부 바늘을 사용하여 파리에서 제거됩니다. testes의 해부에 대한 집게를 사용하는 프로토콜에 비해, 우리의 방법은 잘 연습 개인 400-600 testes을 항복, 시간 당 200-300 야생 형 파리에서 testes을 해부하다 수 있도록, 훨씬 빠른 것입니다. 흰색 벌레 또는 testes 크기를 줄일 돌연변이에서 Testes는 해부하다 일반적으로 시간당 200-400 testes를 얻을 수 어렵습니다.
프로토콜
- 검은 배경과 유리 현미경 슬라이드 만들기 : 현미경 슬라이드와 같은 크기 20 # 백서 컷. 슬라이드 크기 용지 검은 색상의 한쪽 (예, 샤피) 영구 마커를 사용합니다. 검은 측면에 흰색 접착제 (엘머의)를 적용하고 슬라이드에 종이를 준수합니다. 슬라이드 활용할 수 있습니다. 사용 어 "라벨 테이프 (Fisherbrand)가, 장소에서 문제를 해결하기 위해 CO 2 비행 패드로, 최대 현미경 슬라이드, 유리 쪽을 확보.
- 0~3일 오래된 남성의 파리를 수집합니다.
- 얼음 통을 준비, 호수 (PBS), 해부 바늘을 인산 버퍼.
- CO 2의 스트림을 사용하여 50-100 파리 마취시키다과 현미경 슬라이드 근처에 날아 패드로 병이나 유리병에서 그들을 전송.
- 피펫 ~ 현미경 슬라이드 중간에 드롭 50 μl 얼음처럼 차가운 PBS.
- 부드럽게과 남성 파리를 데리러 해부 바늘 수영 PBS의 드롭에 바늘 장소 그걸로 비행의 PBS, 부드러운 터치 복부 측면 (날개 근처 즉,)로 해부 바늘.
- 확고하게 아래로 밀어, 흉부와 복부 사이의 비행 가운데 하나 주사를 놓으십시오. 여섯 번째 (A6) 그리고 일곱 번째 (A7) 복부 세그먼트 (바닥에서 두 번째와 세 번째 줄무늬) 사이의 다른 바늘을 플레이스, 멀리 흉부에서 복부를 가져옵니다.
- 떨어져 특히 다른 기관, 창자에서 testes을 괴롭혀. 특히 흰색 돌연변이에 testes과 용기 비슷. 주요 차이점은 항상 쌍으로 와서 testes 해당되며 각 testis는 나선형 패턴을 보유하고 용기를보다 색상이 더 흰색이다.
- 폴리 프로필렌의 microcentrifuge 관에서 얼음처럼 차가운 PBS에 testes를 저장합니다.
대표 결과 :
그림 1. flybase.org/reports/FBim0000074.html에서 남성의 생식 시스템의 도설보기. Flybase 저작자 :... "밀러 (1950) 페이지에서 508의 그림 38 후 A. 밀러 Drosophila melanogaster의 성충의 내부 해부학과 조직학 M. Demerec, 편집기, Drosophila, 6 장, 페이지 420의 생물학 - 534. 콜드 스프링 하버 연구소 보도 자료, 팩시밀리 판, 1994. 콜드 스프링 하버 연구소 보도 자료에 의해 저작권 1994. 콜드 스프링 하버 연구소 (CSHL)에서 친절한 허가 보도와 함께 사용 참조. http://www.cshlpress.com을 . "
토론
우리는 성인 남자 Drosophila melanogaster에서 testes을 분리하는 프로토콜을 제공합니다. 기술은 하나 두 손으로 조정이 필요하기 때문에, 기술은 연습이 포함되어 있습니다.
공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
저자는 우리 실험실에이 기술을 소개하는 Vasia Vagin 감사합니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 해부용 바늘 | 도구 | Fisher Scientific | S17346 | |
| 현미경 슬라이드, 일반형 | 도구 | Fisher Scientific | 12-553 | |
| 현미경 조명 | 도구 | Schott AG | KO-1500 | |
| CO2 패드 | 도구 | Genesee Scientific | 59-172 | |
| 벤치탑 Flowbuddy 완제품 시스템 | 도구 | Genesee Scientific | 59-122WCU | |
| 버블 가습기 | 도구 | Salter Labs | 7100 | |
| 볼 필러 바늘 | 도구 | Genesee Scientific | 54-119 | |
| ¾” 라벨 테이프 | 소모품 | Fisher Scientific | 15-901-5B |
참고문헌
- Singh, S. R., Hou, S. X. Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell. Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).
재인쇄 및 허가
