이 방법은 생쥐에서 유선 개발 및 기능을 해부하다하고 평가하는 방법에 대해 설명합니다. 우유 방출은 옥시토신 기반 myoepithelial 세포 수축 분석을 사용하여 평가하는 동안 Excised 내유 분비가 전체 마운트를 사용하여 개발의 정도에 대한 평가입니다.
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이 논문에서
요약
초록
인간의 유선은 15-20 엽 (叶)으로 구성되어 있습니다 유두에서 분기 덕트 시스템 오픈에 분비되는 우유. 자체 분비의 폐포 및 수렴 덕트 1 만들어진 단자 덕트 소엽 단위의 다수의 사람 엽 (叶)을 구성하고 있습니다. 마우스에서 유사한 구조는 덕트와 폐포가 결합 조직 기질 내에 interspersed있는 임신에서 관찰됩니다. 마우스 유선의 상피는 세포의 두 레이어, 지하 막 2의 경계으로 표시 myoepithelial 세포의 외부 층으로 둘러싸인 luminal 세포의 내부 레이어로 구성된 관의 시스템과 같은 나무입니다. 출생에서 단 rudimental ductal 나무는 기본 덕트와 15-20 가지로 구성되어, 현재입니다. 호르몬 3,4,5의 영향하에 주변 4 주 사춘기의 시작 부분에 지사 연신율 및 증폭 시작. 10주에서 기질의 대부분은 임신이 때까지 각 estrous주기 분기와 회귀의주기를 받게 될 것이다 덕트의 복잡한 시스템에 의해 침략입니다. 임신의 시작에서 개발의 두 번째 단계는 폐포 6,7 불리는 포도 모양의 우유 분비 구조를 형성하는 상피의 증식과 분화와 함께 시작됩니다. 출산과 젖 분비를 통해 다음, 우유는 luminal 분비 세포에 의해 생산되고 폐포의 루멘 내에 저장됩니다. 여우 서클링에 의해 유도된 신경 반사에 의해 자극 옥시토신 릴리스는, 우유는 그것이 새끼 8 사용할 수있게됩니다 젖꼭지에 덕트를 통해 이송 수 있도록, 폐포 주위와 덕트 따라 myoepithelial 세포의 동기 수축을 유도. 유선 개발, 분화 및 기능을 긴밀하게 조정하고 요구 기질과 상피 사이뿐만 아니라 상호 작용뿐만 아니라 상피 9,10,11 이내 myoepithelial과 luminal 세포 사이에 있습니다. 따라서, 이러한 상호 작용에 연루 많은 유전자에 돌연변이 늦은 임신과 젖 분비 12,13 이어지는 분비 활성화하는 동안 임신 초기, 분화 동안 사춘기 또는 폐포 형성 중에 하나 ductal 신장을 손상 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 마우스 내유 분비를 해부하다하고 전체 마운트를 사용하여 개발을 평가하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 전 생체내 옥시토신 기반 기능 분석을 사용하여 myoepithelial 수축과 우유 방출을 평가하는 방법을 보여줍니다. 유선 개발 및 기능에 유전자 돌연변이의 효과는 따라서 돌연변이와 야생 형 컨트롤 마우스에서이 두 기법을 수행하여 현장에서 확인할 수 있습니다.
프로토콜
1. 유선의 해부
- CO 2 흡입을 사용하여 마우스를 안락사. 그것은 절개가 더 어려워 렌더링, 내유 땀샘 주위에 피가 축적의 목 및 결과의 주요 혈관을 손상시킬 수 있으므로 가능하면 자궁 전위를 피하십시오. 그러나, 다른 기준 등 옥시토신의 혈중 수준과 같은 마우스에서 평가해야하는 경우, 다른 안락사 방법이 귀하의 IACUC에 의해 평가해야하지만, 필요할 수 있습니다.
- 호일에 싸여 폴리스티렌 거품에, 그 뒷면에 마우스를 놓고 사지를 확산. 단단히 16-20 게이지 바늘 (그림 1A)를 사용하여 모든 사지를 핀.
- 70 % 에탄올로 넉넉한 마우스를 스프레이.
- 포셉를 사용하여 정중선에서 복부 피부를 끌어와 날카로운 가위로 작은 절개를합니다.
- 복부 또는 흉부 충치 (그림 1B)를 펑쳐링 피하는 동안 절개부터, 동물의 목에 피부를 잘라.
- "Y 모양"(그림 1B)에서 발생하는 정중선 절개로 앞 다리에 피부를 자르고. 후면 팔다리에 동일한 방법으로 (그림 1B)를 피부를 잘라.
- 부드럽게 마우스의 측면에 복부 및 흉부 피부 껍질, hemostatic 집게를 사용하여. 필요한 경우, 부드럽게 결합하는 조직을 잘라.
- 피부의 아래쪽에 연결된 내유 ....
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토론
유선의 발달과 기능을 긴밀하게 조정됩니다. 돌연변이 마우스는 글랜드 아키텍처 13,12을 평가할 필요성을 강조 유선 개발과 기능에 악영향을 줄 수있는 유전자 변이를 항구 수 있습니다. 유선 개발의 모든 단계에이 문서에 설명된대로 전체 설치는 수행할 수 있습니다. 일반적으로 상피의 개발은 사춘기 (~ 6 주 이내)의 중간에와 2,10 사춘기 (~ 10-12주 이전) 이후, 사춘기 (~ 4 주)의 시작 부분에 평가됩니다. 이 단계에서, 덕트 분기의 금액은, 터미널 최종 꽃봉오리와 관의 길이의 숫자는 글랜드 개발 14,15의 정도를 계량하기 위하여 결정하실 수 있습니다. 마찬가지로, alveologenesis는 (임신 중에 폐포의 개발) 일반적으로 임신 중에 2-3 지점에서 결정됩니다, 젖 분비하고 퇴화하는 동안 발생하는 구조적 변화는 전체 마운트 글랜드 준비 16 관찰하고 계량하실 수 있습니다. 그러나, 늦은 임신과 lactating 생쥐에서 전체 마운.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이러한 연구 CIHR와 DWL에 CBCRA의 보조금에 의해 투자되었다. IP는 CIHR - STP, FRSQ 및 CIHR에서 장학금으로 투자했다. MKGS는 OGS와 CIHR - STP 장학금에 의해 투자되었다. 저자는 마우스 번식과 함께 자신의 도움 케빈 바 주셔서 감사합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 카민 | 시그마 - 알드리치 | C1022 | |
| 알루미늄 칼륨 황산 | 시그마 - 알드리치 | A6435 | |
| 티몰 | 시그마 - 알드리치 | T0501 | |
| 살리실산 메틸 | 시그마 - 알드리치 | M6752 | |
| 옥시토신 | 시그마 - 알드리치 | O3251 |
참고문헌
- Geddes, D. T. Inside the lactating breast: the latest anatomy research. J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).
- Sternlicht, M. D. Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis. Brea....
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재인쇄 및 허가
