원자 힘 현미경에 의해 영상에 대한 세균 고정

요약

라이브 그람 음성 및 그람 양성 세균은 젤라틴 코팅 운모에 고정화 및 원자 힘 현미경 (AFM)을 사용하여 액체에 몇 군데 있습니다.

초록

AFM은 이미징 도구를 기계적으로 프로브 표면 고해상도 (NM 규모)입니다. 그것은 화학 샘플을 치료하기 위해 필요없이, 액체 환경에서, 이미지 세포 biomolecules 수있는 능력이 있습니다. 이러한 목표를 달성하기 위해 예제는 충분히 스캔 AFM의 캔틸레버 팁 의해 끼쳤다 힘에 의해 제거를 방지하기 위해 장착 표면을 준수해야합니다. 많은 경우에, 성공적인 영상이 장착 표면에 시료의 고정에 따라 달라집니다. 최적 고정은 신진 대사 프로세스와 기능 특성이 손상되지 않습니다 같은 샘플을 법으로서해야합니다. 돼지의 (돼지) 젤라틴과 코팅 갓 죽습 운모 표면에 의해 부정 청구 박테리아가 표면에 고정화 수 있으며 AFM에 의해 액체에 몇 군데. 젤라틴 - 코팅 운모에 세균 세포의 고정은 부정 청구 세균과 긍정적인 혐의 젤라틴 사이의 정전 기적 상호 작용에 의한 가능성이 높습니다. 여러 가지 요인은 박테리아가 일시 중지되는 액체, 세균 긴장과 세균이 몇 군데있는 매체의 젤라틴 코팅 운모, 표면 특성에 박테리아의 배양 시간의 화학 성분을 포함하여 세균의 고정과 방해할 수 있습니다. 전반적으로, 젤라틴 코팅 운모의 사용은 이미지의 미생물 세포에 대해 일반적으로 적용할 수 발견됩니다.

프로토콜

1. 미카 준비 :

1. AFM 현미경 (약 22 × 30mm)에 맞게 필요한 크기로 가위로 운모를 (전자 현미경 과학) 잘라.
2. 클리브가 양쪽에있는 미카가 일반적으로 바깥쪽 레이어를 제거하는 테이프를 사용하는 것은 부드럽고 깨지지 레이어가 남을 때까지.

2. 젤라틴 용액의 준비 :

1. 실험실 병에 증류수 100 ML을 추가합니다.
2. 물이 끓기 시작할 때까지 전자 레인지에 병을 열. (전자 레인지를 사용할 수없는 경우, 물은 뜨거운 접시에 비커에 가열 수 있습니다.)
3. 젤라틴 0.5 g (를 시그마 G - 6144, G - 2625 또는 G - 2500)가 무게와 뜨거운 증류수에 추가할 수 있습니다.
4. 부드럽게 소용돌이는 젤라틴까지 병이 완전히 녹아있다.
5. 60-70 ° C.에 젤라틴 용액을 쿨
6. 컷 죽습 미카가 담근 수있는에 작은 비커 (20 ML)에 약 15 ML 하거라.

3. 미카 코팅 :

1. 예열 젤라틴 용액에 잠수함 미카 사각형과 운모가 (그림 1A) 코팅되어 신속하게 철회 등.
2. 코팅 후 (그림 1B....

토론

다양한 요인에 의해 미생물의 AFM 장착 휴대폰 및 이미징에 영향을 미칠 수 있습니다. 코팅에 사용되는 젤라틴은 운모가 중요합니다. 상업 젤라틴은 물고기, 소, 돼지를 포함한 척추 동물의 숫자에서 격리됩니다. 기원과 처리 방법은 모두 고정 세균에 대한 젤라틴의 적합성을 결정합니다. 다양한 소스 및 젤라틴의 종류 immobilizing 박테리아에서 효과에 대한 평가되었다 [1]. 두 가지 가장 효과적인 gelatins는 시그마 G - 6144과 G - 2625로 발견되었다. 돼지 (돼지의)에서 파생이 gelatins는 각각 낮은 블룸와 매체 블룸로 간주됩니다. 젤라틴 - 대우 기판과 공부하는 박테리아의 특정 변형 사이의 호환성을 테스트하는 것이 중요합니다. 중요한 가축에서 유래 젤라틴은 (소) 테스트 박테리아 중 하나를 immobilizing 효과적으로되지 않았습니다. 세포 고정을위한 간단한 테스트는 샘플 물 또는 버퍼 (단계 4.6 이후)와 rinsing 후, 운모에 드라이 수 있도록 포함됩니다. 박테리아가 움직일 수있다면, .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이름	회사	카탈로그 번호
젤라틴	시그마, 세인트 루이스, MO	G6144, G2625 또는 G2500
PicoPlus 원자 포스 현미경	애질런트 테크놀로지 템피, AZ
AFM의 cantilevers	Veeco, 산타 바바라, CA	MLCT - AUHW