스냅 냉동에 의한 쥐 뇌의 동결 보존: 조직학적 분석을 위해 전체 마우스 뇌 표본을 빠르게 동결하는 기술

초록

출처: Comba, A. et al. 종양 내 이질성, 종양 스트림 및 침입의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 하위 영역의 레이저 캡처 미세 해부. J. Vis. 특급 (2020)

이 비디오는 종양 조직에서 별개의 해부학적 영역이나 특정 세포 집단을 분리하기 위해 마우스의 뇌를 동결 보존하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 후속 분석을 위해 뇌 조직 형태의 최적 광학 해상도를 얻는 데 중요합니다.

프로토콜

1. 신경교종 종양이 있는 뇌의 동결보존(Cryopreservation of Brains Doing Glioma Tumors)

1. 뇌를 동결 보존하기 전에 차가운 이소펜탄/2-메틸부탄으로 채워진 병을 준비하고 액체 질소로 채워진 용기에 넣습니다. 용제를 식히십시오.
2. 30% 자당 용액에서 뇌를 제거하고 여과지에 두드려 말립니다.
3. cryomold에 영구 마커로 레이블을 지정합니다. 기포를 피하기 위해 약 5mL의 OCT(최적 절단 온도 화합물)를 극저온 몰드 중앙에 조심스럽게 첨가합니다.
4. 원하는 방향으로 OCT가 들어 있는 극저온 몰드에 뇌를 넣습니다. 뇌가 완전히 잠길 때까지 틀을 OCT로 채웁니다. 깨끗한 집게를 사용하여 OCT가 있는 냉동 몰드와 뇌를 차가운 이소펜탄/2-메틸부탄에 빠르게 넣습니다.
5. OCT가 응고되면(~30–40초) 뇌와 함께 냉동 몰드를 제거하고 드라이아이스에 넣습니다. 고체 OCT에 균열을 일으킬 수 있으므로 2-메틸부탄이 포함된 곰팡이를 2분 이상 방치하지 마십시오. 뇌와 함께 냉동 몰드를 알루미늄 호일로 싸서 -80°C에서 보관하십시오.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
일회용 임베딩 금형 제거	전자 현미경 과학	70182
연구 저온 유지 장치	라이카	CM3050S
Tissue-Plus O.C.T. 컴파운드	피셔 사이언티픽	제23-730-571

호