동결 마우스 뇌 조직 절편: 냉동 쥐 뇌 조직에서 얇은 동결 조직 절편을 얻는 절차

초록

출처: Comba, A. et al. 레이저 캡처 종양 내 이질성, 종양 스트림 및 침입의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 하위 영역의 미세 해부. J. Vis. 특급 (2020년)

이 비디오에서는 저온 유지 장치를 사용하여 얼어붙은 쥐의 뇌종양 조직을 절단하는 방법을 보여줍니다. 이렇게 얻어진 동결된 뇌 조직 절편은 추가 분석이 있을 때까지 저온에서 보관됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동결 뇌종양 조직 절편

1. 라벨 2μm 폴리에틸렌 나프탈레이트(PEN) 슬라이드를 샘플 정보와 함께 표시합니다. 조직 절편은 절편 후 이 슬라이드에 직접 배치됩니다.
2. 저온 유지 장치 챔버의 온도를 -20에서 -24 °C 사이로 설정합니다. 절편화하기 전에 샘플 블록을 저온 유지 장치 챔버에 놓고 30-60분 동안 챔버의 온도와 평형을 이루도록 합니다.
3. 저온 유지 장치 챔버와 나이프 홀더를 100% 에탄올로 세척하고 RNase 세척 용액과 함께 사용할 브러시를 스프레이합니다. 저온 유지 장치 챔버 내부에서 작업하면서 주형을 제거하고 뇌가 포함된 OCT 블록을 OCT를 사용하여 저온 유지 장치 표본 디스크에 부착합니다. 디스크 홀더에 블록을 놓고 블록을 칼날에 맞춥니다.
4. 단면 홀더에 일회용 블레이드를 설치합니다.
5. 뇌를 10μm 두께로 절단합니다. 조직에 줄무늬나 긁힌 자국이 없는지 확인하십시오. 붓을 사용하여 조심스럽게 조직을 평평하게 펴고 절단 표면에 펴십시오.
6. 뇌 절편을 포함하는 조직을 RNase-free PEN 유리 슬라이드에 조심스럽게 장착합니다. 양전하를 띤 유리 슬라이드를 손가락으로 조직 방향으로 뒤집고 유리 슬라이드를 조직 섹션 쪽으로 부드럽게 누릅니다.
   메모: 손의 온도는 조직이 유리에 부착되는 데 도움이 됩니다.
7. 뇌 절편을 슬라이드에 장착한 후 슬라이드를 저온 유지 챔버 내부의 상자에 보관한 다음 -80°C에서 보관하십시오. 슬라이드를 실온에 보관하지 마십시오.
   메모: 조직이 접히거나 찢어지는 것은 흔한 일입니다. 정확한 사후 분석을 위해서는 이러한 아티팩트를 최소화하는 것이 중요합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PEN 멤브레인 유리 슬라이드(2μm)	리에카	1150518
연구 저온 유지 장치	라이카	CM3050S
RNaseZap RNase 오염 제거 솔루션	피셔 사이언티픽	AM9780
일회용 임베딩 금형 제거	전자 현미경 과학	70182
Pinpoint 솔루션	자이모 리서치	D3001-1
Tissue-Plus O.C.T. 컴파운드	피셔 사이언티픽	제23-730-571

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