헤드스페이스 가스 크로마토그래피: 제브라피시 배아의 에탄올 농도를 평가하는 기법

초록

출처: Lovely, C. B. et al. 헤드 스페이스 가스 크로마토그래피를 사용한 제브라피시 배아의 에탄올 수준 정량화. J. Vis. 특급 (2020).

이 동영상은 헤드스페이스 가스 크로마토그래피를 사용하여 제브라피시 배아의 에탄올 농도를 측정하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 휘발성 유기 화합물의 정성 및 정량 분석에 유용한 도구를 제공합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 물 치환을 이용한 배아 부피 측정

참고: 이 프로토콜에서는 24시간 수정(hpf) 배아(그림 1)가 사용됩니다. 부피 측정에 사용된 배아는 에탄올 분석에 사용되지 않습니다.

1. 250μL 부피로 표시된 1.5mL 마이크로 원심분리 튜브에 10개의 배아와 배아 외 유체를 넣습니다(그림 2A). 250μL 주입 라인에 물을 추가합니다(그림 2B에서 염색된 물이 있는 샘플 참조).
2. 1.1단계를 반복하여 맥락막이 제거된 배아를 위한 용기를 설정합니다.
   1. 융모막을 제거하려면 융모막에 있는 배아를 100mm 페트리 접시에 넣고 배아 배지에 2mg/mL의 프로테아제 칵테일을 넣고 실온(RT)에서 10분 동안 놓습니다. 몇 분에 한 번씩 배아를 부드럽게 휘젓아 융모막을 끊습니다.
   2. 모든 배아가 융모막에서 벗어나면 프로테아제 칵테일/배아 배지에서 제거된 배아를 제거하고 새 배아 배지가 있는 새 100mm....

결과

그림 1 : 융모막 내부의 24시간 수정(hpf)에 있는 배아의 이미지. 배아와 난황은 배아 외 액체로 둘러싸여 있으며, 모두 융모막 내부에 있습니다.

그림 2 : 배아의 부피를 측정하고 분석을 위해 배아를 처리하는 프로토콜. (A) 250μL 부피로 표시된 1.5mL 마이크로 원심분리 튜브로 이식된 24hpf 배아 10개. (B) 배아에 물이 채워진 마이크로 원심분리 튜브(물은 염색되어 250μL 표시에서 더 쉽게 볼 수 있음). (C).......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
오토샘플러, CP-8400	바리안		기체 크로마토그래프 자동시료주입기
에탄올	디콘 랩스	2701
폴리테트라플루오로에틸렌/실리콘 격막 및 플라스틱 캡이 있는 가스 크로마토그래프 바이알 2mL	애질런트	8010-0198	세척 후 바이알은 재사용할 수 있지만 캡/격막은 재사용할 수 없습니다.
가스 크로마토그래프, CP-3800	바리안
헬륨			대학과 계약에 의해 제공
HP Innowax 캐필러리 컬럼	애질런트	19095N-123I	30m x 0.53mm x 1.0μm 필름 두께
하이드로젠			대학과 계약에 의해 제공
마이크로 원심분리기 튜브 1.5 mL	피셔 사이언티픽	2682002
마이크로피펫 팁 10 μL	피셔 사이언티픽	13611106
마이크로피펫 팁 1000 μL	피셔 사이언티픽	13611127
마이크로피펫 팁 200 μL	피셔 사이언티픽	13611112
Pipetman L p1000L 마이크로피펫	길슨	FA10006M
Pipetman L p200L 마이크로피펫	길슨	FA10005M
Pipetman L p2L 마이크로피펫	길슨	FA10001M
폴리테트라플루오로에틸렌/실리콘 격막 및 플라스틱 캡	애질런트	5190-7021	가스 크로마토그래프 바이알용 교체용 캡/격막
고체상 미세추출 섬유 어셈블리 Carboxen/Polydimethylsiloxane	밀리포어 시그마	57343-유	교체용 섬유
스타 크로마토그래피 워크스테이션	바리안		크로마토그래피 소프트웨어
Thermogreen Low Bleed (LB-2) 격막	밀리포어 시그마	23154	교체용 주입구 격막

년 년