마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

Summary

중간 대뇌 동맥 (MCA) 내고 동물 모델에 초점 대뇌 국소 빈혈을 연구하는 기술입니다. 이 방법에서는, 중간 대뇌 동맥 craniotomy에 의해 노출 소작된에 의해 출혈도 잡았. 이 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다.

Abstract

초점 대뇌 국소 빈혈 환자에서 볼 뇌졸중의 가장 일반적인 유형 중 하나입니다. 때문에 임상 중요성에 허혈성 모욕하는 동안 펼쳐 이벤트를 연구하기 위해 적절한 동물 모델을 개발하기 위해 장기간 노력하고있다. 이러한 기법은 가장 일반되는 설치류와 다양한 동물 모델을 사용하여 과도하거나 영구적인 초점 또는 글로벌 국소 빈혈 모델을 포함합니다.

또한 문학 pMCAo로 불리는 영구 MCA의 결합 방법은 설치류 ^1-6에 초점 국소 빈혈 모델로 광범위하게 사용됩니다. 이 방법은 원래 타무라 외 의해 쥐에 대해 설명했다. 1981 ^7인치 이 프로토콜에서는 craniotomy은 MCA와 근위 지역이 electrocoagulation에 의해 occluded되었습니다 액세스하는 데 사용되었다. infarcts는 폐색의 위치에 따라 대부분 피질과 때로는 striatal 지역을 포함하고 있습니다. 이 기술은 이제 잘 설립하여 많은 실험실 ^8-13에서 사용됩니다. 이 기술의 조기 사용 "경색 코어"와 ^{"penumbra"14-16의} 정의 및 설명을 주도하고, 그것은 종종 잠재 neuroprotective 화합물 ^{10, 12, 13, 17을} 평가하는 데 사용됩니다. 초기 연구는 쥐에서 수행 되었으나, 영구 MCA의 결합은 약간의 수정을 ^18-20로 생쥐에서 성공적으로 사용되었습니다.

이 모델은 재현성 infarcts 증가 후 생존 속도를 산출. 인간의 허혈성 뇌졸중의 약 80 %가 MCA 지역 ²¹ 일이되므로이 뇌졸중 연구의 관련성이 매우 모델입니다. 현재 뇌졸중 환자에 사용할 효과적인 치료법의 소수가, 따라서 잠재적인 약리 화합물을 테스트하고 생리적 결과를 평가하는 좋은 모델 필요가있다. 이 방법은 생체내 세포에서 hypoxia 응답 메커니즘을 연구하고 사용할 수 있습니다.

여기, 우리는 C57/BL6 마우스에서 MCA의 내고 수술을 제시한다. 우리는 미리 수술 준비, MCA의 결합 수술과 경색 볼륨 부량 위해 2,3,5 Triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 얼룩을 설명합니다.

Protocol

이 프로토콜은 연구에 동물의 윤리적 사용 (UCAR)에 전념 로체스터위원회의 대학에 의해 승인되었습니다. 무균 기법은 프로토콜 동안에 따라야한다. 무균 장갑과 마스크의 사용이 필요합니다.

프로토콜 동안 사용되는 모든 장비, 재료, 화학 물질 및 도구는 표 1에 설명되어 있습니다.

1. 사전 수술 준비

1. 즉시 수술 후 후 처음 24 H 포스트 수술 기간 동안 매일 3-5 H, buprenorphine (0.05mg/kg) 수술 전에 2 H와 subcutaneously 쥐를 주사.
2. 압력솥의 모든 수술기구, 거즈 스폰지, 그리고 면화 팁 applicators을 소독. 바로 사용하기 전에 멸균 거즈에 건조 수술과 공기 중에 70 % 에탄올에 수술 도구를 보관하십시오. 70 % 에탄올로 작업 영역을 스프레이.
3. 마취 기화기를 사용하여 3 % isofluorane - 20 %의 산소 기체 혼합물로 마우스를 마취. 유량계와 산소 금액을 조정합니다. 발가락이나 꼬리 곤란 (그들은 응답한다)에 의해 마취의 수준을 테스트합니다. 2퍼센트 (V / V) isofluorane과 마취의 수준을 유지합니다.
4. 마우스의 눈에 인공 눈물을 적용하고 ....

Discussion

영구 MCA의 결합 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다. 절차의 간편하고 짧은 기간 (~ 30 분)는 더욱 실용적합니다. 방법은 널리 마우스 및 쥐 모두에서 사용됩니다.

이 기술은 stereomicroscope 아래 침략 수술을 필요로합니다. 따라서 현미경으로 운영하고 성공적인 craniotomy을 완성 경험이 필수적입니다. 실험이 수행되기 전에 연구실에서 일관성 infarcts를 확립하는 것이 좋습니다. 재현성 결과를 달성하기 위해서는 똑같은 위치에서 매번 MCA를 ligate하는 것이 중요합니다. MCA는 subcortical infarcts이 원하는 경우에는 지점을 lenticulostriate하는 근위 출혈도 잡았해야합니다. 동맥 완전히 출혈도 잡았 및 폐색은 영구적입니다. 그러므로이 모델은 MCA를 통해 reperfusion을 허용하지 않습니다. 이 예제에 포함되지 않지만, 그것은 도플러 프로브는 동맥.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
NAME	회사 및 카탈로그 번호
A. 솔루션 및 화학 물질
Povidone - 요오드 솔루션, 외과 스크럽	Aplicare, 82-209
70 % 에탄올	Koptec, V1001
2,3,5 Triphenyltetrazolium 염화 (TTC)	시그마, T8877
4 % Paraformaldehyde	전자 현미경 과학, 159SP
7.4 : 인산이 살린, 산도를 버퍼	만든 실험실에서 살균.
미네랄 오일	PML Microbiologicals, R6570
Isofluorane	버틀러 회사, 029,405
Buprenorphine (0.3mg/ml)	Hospira, NDC 0409-2012-32
인공 눈물	버틀러 회사, 007,312
복구 젤	지우기 H 2 O, 72-01-5022
B. 외과 재료 및 장비
10-12주 오래된 C57/BL6 마우스,	식민지는 대학 동식물 사육장에서 자랐다는
100 % 산소 탱크	Airgas
마취 기화기 및 유량계	Surgivet, 모델 100
직장 프로브와 함께 가열 패드	파인 과학 도구, TR200
해부 현미경	자이스 혈구, Stemi 2000
난방 패널	페트코 서비스 (주) 0307-013
소형 선박 Cauterizer 세트	파인 과학 도구 18000-00
미니 연동 펌프	하버드 장치, MPII
1ml 주사기	BD, 329,650
18G의 바늘	백톤 디킨슨, 305,196
외과 5.0 나일론 봉합사	Ethilon, 698H
블록 Sectioning	켄트 과학, 1mm
단일 에지 면도날	전자 현미경 과학, 71962
라벨 테이프	Scienceware, 벨 - 예술 제품 F13463 - 2075
거즈 스폰지	켄들 큐리티 2252, 존슨 앤드 존슨 6,415
커튼 팁 Applicators	청교도 806 - WCL
C. 외과 도구
외과 스프링 가위	파인 과학 도구 15003-08
Microdissecting 포셉는 직각	파인 과학 도구 45분의 5
Microdissecting 포셉는 곡선	좋은 과학 도구 5 티
파인 직선 가위	파인 과학 도구 14568-12
곡선 뼈 rongeur	파인 과학 도구 16021-14
하트먼 Hemostat가 휘어	파인 과학 도구 13003-10