In Vitro Culture and Differentiation of Primary Monocytes into Macrophages

초록

출처: Plaisance-Bonstaff, K., et al. Isolation, Transfection, and Culture of Primary Human Monocytes. J. Vis. 특급. (2019년)

이 비디오는 일차 단핵구를 대식세포로 프라이밍하는 방법을 보여줍니다. 1차 인간 단핵구는 과립구-대식세포 집락자극인자(GM-CSF)를 사용하여 M1-like 전염증성 표현형으로 분리 및 분화할 수 있으며, 대식세포 집락자극인자(M-CSF)를 사용하여 M2-like 항염증성 표현형으로 분화할 수 있습니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 면역자기 음성 선택에 의한 일차 인간 단핵구의 분리

1. 4개의 10mL 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 진공관(튜브당 혈액 10mL)에 신선한 인간 전혈 40mL(HIV⁺ 환자 또는 건강한 대조군으로부터)를 수집합니다. 생물 안전 작업대에서 멸균 기술을 사용하여 40mL의 혈액을 모두 하나의 50mL 원추형 프로필렌 튜브로 옮깁니다.
2. 선택한 인간 단핵구 분리 키트에 대한 제조업체의 프로토콜(Table of Materials)에 따라 키트에 제공된 단핵구 분리 칵테일 2mL를 혈액 튜브에 추가합니다. 키트에 제공된 Vortex 마그네틱 비드를 30초 동안 사용하고 혈액 튜브에 2mL를 추가합니다.
   1. 사용할 수 있는 혈액이 40mL 미만인 경우 추가된 시약을 축소합니다. 용액을 혼합하려면 플라스틱 25mL 혈청학적 피펫을 위아래로 피펫하고 실온(RT)에서 5분 동안 배양합니다.
3. 혈액 혼합물을 4개의 50mL 튜브에 균....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.5M 에다	인비트로젠	AM9260G
BD Vacutainer 플라스틱 혈액 수집 튜브(K2EDTA 포함)	BD 바이오사이언스	366643
Easy 50 EasySep 자석	스템셀 기술	18002
Easy Sep Direct 인간 단핵구 분리 키트	스템셀 기술	19669
Fetal Bovin Serum Defined Heat 비활성화	하이클론	SH30070.03안녕하세요
Nunc 35mm 세포 배양 접시	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	150318
PBS (PBS)	지브코	20012027
페니실린-스트렙토마이신	지브코	15140122
재조합 인간 GM-CSF	R&D 시스템	215-GM-050
재조합 인간 M-CSF	R&D 시스템	제216-MC-025
RPMI 1640과 L-글루타민	코 닝	10040CVMP (영문)

년 년 )