면역 체계 및 구성 요소

이 비디오에서는 면역자기 음성 분리를 통해 전인의 혈액에서 단핵구를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 단핵구는 추가 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

이 비디오에서는 마우스 간에서 Kupffer 세포 또는 간 대식세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 간에는 소화 용액이 관류된 후 밀도 구배 분리가 이루어집니다. 분리된 부착 Kupffer 세포는 추가 분석에 사용할 수 있습니다.

이 비디오는 기계적 해리 기술을 사용하여 쥐의 등뿌리 신경절(DRG)에서 대식세포를 분리하는 효소가 없는 프로토콜을 보여줍니다. 새로 채취한 DRG 조직의 균질화가 완료되면 대식세포의 세포 표면 수용체에 대한 항체를 사용하여 세포를 형광으로 라벨링한 다음 유세포 분석을 수행하여 샘플에 대식세포의 존재를 확인합니다.

이 비디오에서는 수확된 마우스 Peyer's patch에서 림프구를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 림프구는 추가 분석에 사용할 수 있습니다.

이 비디오에서는 밀도 구배 원심분리를 통해 인간 버피 코트에서 단핵구와 림프구를 포함하는 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs)를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 PBMC는 추가 분석에 사용할 수 있습니다.

이 동영상에서는 non-B 세포 및 스트렙타비딘 접합 자성 마이크로비드에 특이적인 비오틴화 항체를 사용하여 인간 말초 혈액에서 B 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

이 비디오에서는 생쥐의 긴 뼈에서 골수 기질 세포의 분리 및 배양을 보여줍니다. 분리된 부착 BMSC는 추가 분석에 사용할 수 있습니다.

이 비디오는 기능화된 부력 활성화 세포 분류(BACS) 기술을 사용하여 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 T 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리 기술은 세포에 비오틴화된 항-CD3 항체를 표지하고 스트렙타비딘 결합 마이크로버블을 사용하여 항체 결합 세포를 분리하여 CD3+ T 세포를 긍정적으로 선택하는 것을 포함합니다.

이 비디오에서는 인간 1차 T 세포 활성화를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 항-CD3 및 항-CD28 항체로 코팅된 마그네틱 비드로 미접촉 T 세포를 배양한 후 인터루킨-2 또는 인터루킨-15 처리를 진행하면 미접촉 T 세포가 활성화되고 분화 및 이펙터 또는 기억 T 세포로 증식합니다.

이 비디오에서는 강제 관류에 의해 쥐의 간에서 변두리 간 백혈구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

이 비디오는 자연 살해 세포 또는 NK 세포를 포함한 림프구를 선택적 증식을 위해 인간의 간 조직에서 분리하는 방법을 보여줍니다. 효소 및 기계적 분해 후 밀도 구배 분리는 NK 세포를 포함한 림프구 분리를 촉진합니다. 수집된 림프구는 NK 세포의 선택적 증식에 추가로 사용될 수 있습니다.

이 비디오는 피더 세포주를 사용하여 말초혈액 단핵세포(PBMC)에서 직접 자연살해(NK) 세포를 증식하는 기술을 보여줍니다. PBMC는 막결합 인터루킨-21(mIL-21)을 발현하는 유전자 변형 림프모세포 공급세포와 공동 배양되며, 배양액에는 사이토카인 인터루킨-2(IL-2) 및 인터루킨-15(IL-15)가 보충됩니다. 이 리간드의 칵테일은 함께 고순도의 NK 세포의 장기간 증식으로 이어집니다.

이 비디오는 고환의 구성 요소인 쥐 정세관에서 Sertoli 세포를 분리하는 절차를 보여줍니다. 효소 분해 및 반복 세척은 Sertoli 세포가 용액으로 방출되는 것을 촉진하며, 이는 증식 및 성장을 위해 추가로 배양될 수 있습니다.

이 비디오는 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 CD4+Vδ1+γδ T 세포의 저농도 집단을 자기 라벨링 기반으로 분리하는 프로토콜을 보여줍니다. FITC-conjugated anti-Vδ1 antibodys, magnetic anti-FITC microbeads 및 anti-CD4 antibody-coated superparamagnetic beads의 조합을 사용하여 CD4+Vδ1+ T cell은 PBMC 집단에서 성공적으로 정제될 수 있습니다.

이 비디오에서는 종양이 있는 마우스의 혈액에서 불연속 자당 구배 원심분리를 통해 세포독성 고밀도 호중구와 저밀도 호중구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

이 비디오는 마우스 모델에서 치은 면역 세포 네트워크의 분리 절차를 보여줍니다. 효소 소화는 부착된 치아와 뼈에서 잇몸 조직을 방출하고, 이는 더 기계적으로 소화되어 치은에서 면역 세포를 방출합니다. 분리된 세포는 면역학 실험을 할 준비가 되었습니다.

이 비디오는 성체 마우스의 복막강에서 성숙한 결합 조직형 비만 세포를 분리하기 위한 복막 세척 방법을 보여줍니다. 복막강에서 1차 면역 세포의 혼합물을 분리한 후, 적절한 배양 조건에서 비만 세포의 선택적 증식을 수행합니다.

이 비디오에서는 자기 활성화 세포 분류를 사용하여 쥐 새끼 뇌에서 미세아교세포를 포함한 CD11b 세포를 분리하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 뇌 조직을 균질화하여 단세포 현탁액을 얻고, 이 현탁액은 항-CD11b 항체로 코팅된 마이크로비드로 배양된 후 자기 컬럼 기반 분리를 통해 CD11b+ 세포 집단을 정제합니다.

이 비디오는 마우스 모델에서 서혜부 배출 림프절의 외과적 분리 절차를 보여줍니다. 복부 부위를 절개하면 서혜부 림프절에 접근할 수 있으며, 이 림프절은 외과적으로 적출됩니다. 채취된 반투명 서혜부 림프절은 면역학 연구에 사용할 수 있습니다.

이 비디오는 쥐의 뒷다리에서 슬와골 배출 림프절을 채취하는 해부 기술을 보여줍니다. 림프절은 선천성 면역과 적응 면역을 연결하는 데 중요한 역할을 하며, 보존된 조직 구조와 세포 생존력을 가진 온전한 림프절을 채취하면 국소 및 전신 면역 반응을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

이 비디오는 일차 단핵구를 대식세포로 프라이밍하는 방법을 보여줍니다. 1차 인간 단핵구는 과립구-대식세포 집락자극인자(GM-CSF)를 사용하여 M1-like 전염증성 표현형으로 분리 및 분화할 수 있으며, 대식세포 집락자극인자(M-CSF)를 사용하여 M2-like 항염증성 표현형으로 분화할 수 있습니다.

이 동영상은 인간 유도 만능 줄기 세포(iPSC)에서 대식세포를 생성하는 시험관 내 방법을 설명합니다. iPSC에서 대식세포 생성은 3단계로 발생합니다: (i) 현탁액에서 iPSC가 응집되어 중배엽 세포로 분화하는 3차원 배아체(EB)를 형성하고, (ii) 분화된 EB에서 대식세포 전구세포가 형성되고, (iii) 대식세포 전구세포가 성숙하고 기능적인 대식세포로 분화됩니다.

이 비디오에서는 말초 혈액 유래 단핵구를 M1 또는 M2 대식세포로 분화 및 분극을 유도하는 절차를 보여줍니다. 과립구-대식세포 집락자극인자, 지질다당류, 인터페론-감마를 이용한 배양은 전염증성 M1 대식세포를 생성하고, 대식세포 집락자극인자와 인터루킨-4를 사용한 배양은 항염증성 M2 대식세포 생산을 유도합니다.

이 동영상은 일반적인 림프구 전구 세포(CLP)에서 형질세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC)를 생성하는 체외 분석을 보여줍니다. Fms-like tyrosine kinase-3 ligand(FL)가 있는 상태에서 γ조사된 공급 세포와 함께 정제된 CLP를 공동 배양하면 CLP는 비부착성 pDC로 분화되며, 유세포 분석을 사용하여 그 존재를 확인합니다.

이 비디오는 인간 단핵구에서 미성숙, 성숙 및 내성 수지상 세포(DC)의 생성을 보여줍니다. 성장 인자와 사이토카인을 가진 단핵구의 배양은 미성숙 DC의 생산으로 이어집니다. 면역 조절 분자에 대한 반응으로 미성숙 DC는 내성 및 성숙 DC로 분화합니다.

이 비디오는 골수 기질 세포(BMSC)가 지방 세포로 분화되는 과정을 보여줍니다. 2단계 과정에서, 특정 성장 인자와 호르몬이 존재할 때, 미분화된 BMSC는 먼저 지방세포로 분화합니다. 포도당과 인슐린 치료와 관련된 두 번째 단계는 여러 지질 방울을 가진 성숙한 지방 세포의 형성으로 이어집니다.

이 비디오는 거핵세포의 분화와 혈소판 형성을 위한 기술을 보여줍니다. 인간 탯줄 혈액에서 분리된 조혈 줄기 전구 세포는 트롬보포이에틴이 존재하는 상태에서 성숙한 거핵세포로 분화합니다. 성숙한 거핵세포는 프로혈소판(proplatelet)이라고 하는 세포질 확장을 생성하며, 이는 개별 혈소판을 생성합니다.

이 동영상은 3차원 흉선 배양 시스템을 사용하여 iPSC 유래 미성숙 T 세포에서 기능적 항원 특이적 T 세포를 생성하는 프로토콜을 보여줍니다. iPSC 유래 미성숙 T 세포를 내인성 림프구가 고갈된 마우스 태아 흉선엽과 함께 배양한 결과, T 세포가 성공적으로 성숙하여 CD8αβ+ MHC 클래스 I+ iPSC 유래 흉선 이민자(iTE)를 형성했습니다.

이 비디오에서는 쥐 전혈에서 혈소판을 정제하는 프로토콜과 혈소판 작용제인 트롬빈을 통한 후속 활성화에 대해 설명합니다. 유세포 분석으로 분석할 때, 정제된 휴면 혈소판은 세포 표면 마커 CD41의 발현을 기반으로 특성화되는 반면, 정제된 활성 혈소판은 표면 마커 CD41 및 CD62P를 모두 함께 발현합니다.

이 비디오는 호중구 세포 외 트랩(NET)을 생성하고 분리하는 시험관 기술을 보여줍니다. 호중구는 말초 혈액에서 분리되고 phorbol myristate acetate (PMA)로 자극되어 NET을 생성합니다. 배양 과정에서 호중구는 세포 사멸 과정(NETosis)을 거쳐 과립 세포질 단백질과 혼합된 응축된 염색질로 구성된 NET을 방출합니다.

이 비디오는 과립구-대식세포-군집-자극 인자 또는 GM-CSF 생산 T 도우미 세포(TH GM)의 체외 분화를 보여줍니다. 분리된 naive T cell은 THGM으로 분화하기 위해 자극되며, 이는 높은 세포 내 GM-CSF 생산과 다른 T helper cell specific cytokine의 낮은 발현을 감지하여 확인됩니다.

이 동영상은 비만 세포의 탈과립 활성을 결정하기 위한 비색 분석을 보여줍니다. 비만 세포에서 방출되는 효소는 기질을 가수분해하고 착색된 생성물을 생성합니다. 비만 세포의 탈과립 활성은 세포 내 총 효소 함량으로 정규화된 세포 외부의 효소 방출 비율로 측정되었습니다.

이 비디오에서는 인간 말초 혈액 B 세포에서 naive B cell, memory B cell 및 plasmablast plasma cell subpopulation의 유세포 분석 기반 분류를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 서로 다른 B 세포 하위 집단은 B 세포 표면에서 발현된 CD19, CD27 및 CD38 수용체에 대한 형광단 기반 항체 결합에 따라 구별된 후 세포 분류를 기반으로 구별할 수 있습니다.

이 동영상은 항체를 분비하는 B 세포(ASC)의 기능을 평가하기 위해 ELISpot 분석을 사용하는 방법을 보여줍니다. ASC에 의해 분비된 항체는 효소 접합 IgG 또는 IgM 항체에 의해 검출되는 막 결합 다클론 항체 단편과 상호 작용합니다. 각 웰에서 생성된 착색된 반점은 특정 항체의 동형이 존재함을 나타내며, 이는 B 세포의 분비 활동과 관련이 있습니다.

이 비디오에서는 쥐 췌장 배출 림프절(PDLN)에서 단일 세포를 분리하는 프로토콜과 유세포 분석을 사용하여 단일 세포 집단에서 조절 T 세포(Tregs)를 특성화하는 방법에 대해 설명합니다. Tregs는 핵 전사 인자 Foxp3 및 Helios와 함께 세포 표면 마커 CD4, CD25 및 Nrp1의 양성 발현을 기반으로 식별됩니다.

출처: Bello-Gamboa, A. et al., 인간 면역학적 시냅스 이미징.J. Vis. 특급(2019년)
이 비디오는 형광 현미경을 사용하여 항원 제시 세포와 보조 T 림프구 사이의 면역학적 시냅스 형성에 대한 체외 연구를 보여줍니다. 보조 T 림프구의 T 세포 수용체는 항원 제시 세포의 항원-MHC-II 복합체와 상호 작용하여 면역학적 시냅스를 형성한 후 시냅스를 향한 분비 소포 이동이 이어지며, 이는 형광 현미경으로 시각화됩니다.

이 비디오에서는 말초 혈액 단핵 세포 배양에서 확장된 사이토카인 유도 킬러 T 세포, CIK 세포의 비율을 결정하기 위한 유세포 분석 기반 기술을 보여줍니다.

이 비디오는 쥐의 비장에서 IFN-γ(in situ interferon-gamma) 분비를 시각화하는 이미징 방법을 보여줍니다. 세균 감염 및 T 세포 및 자연 살해 세포 내부에 IFN-γ 축적 유도 후 비장은 마우스에서 채취됩니다. 조직 절편을 얻으면 세포 내부의 IFN-γ을 시각화하기 위해 면역염색을 수행합니다.

이 동영상에서는 쥐의 폐 조직에서 대식세포 세포외 트랩(MET)의 면역염색 및 컨포칼 현미경 기반 시각화를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 조직 상주 대식세포는 대식세포 특이적 F4/80 표면 당단백질 마커의 발현을 특징으로 하는 반면, MET는 MET 마커 매트릭스 금속단백분해효소 9, 시트룰린 히스톤 H3 및 세포외 염색질을 라벨링하여 시각화합니다.

이 비디오는 쥐 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 유도하기 위해 항원 보조 에멀젼을 생성하는 효율적인 균질화 기술을 보여줍니다. 에멀젼은 물 상태에 자가항원인 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)을 함유하고 있으며, 불활성화된 병원성 박테리아로 구성된 연속적인 오일 상태로 둘러싸여 있습니다. 에멀젼은 장기적인 면역 반응을 위해 항원의 지속적인 방출을 보장합니다.

이 비디오는 컨포칼 현미경을 사용하여 형질전환 마우스에서 γδ 상피내 림프구(IEL)를 시각화하는 방법을 보여줍니다. 수술 절차에는 천공 라인을 만들고 장 점막과 융모를 노출시키기 위해 세로로 절개하는 것이 포함됩니다. 형질전환 마우스는 γδ IEL에서만 리포터 단백질을 발현하여 추적을 가능하게 합니다. Intravital 이미징은 장 상피 세포의 기저막을 따라 녹색 형광 표지된 γδ IEL의 동적 움직임을 캡처합니다.

이 비디오는 악티노마이신-D로 치료한 후 T 림프구에서 T 림프구 유래 미립자(LMP)의 생성 및 분리를 보여줍니다.

이 비디오는 항원 펩타이드가 로드된 MHC-Igs 및 항-CD28 항체로 기능화된 자기 나노입자 기반 인공 항원 제시 세포(aAPC)를 사용하여 희귀 항원 특이적 CD8+ T 세포를 분리하는 프로토콜에 대해 설명합니다. aAPC와 항원 펩타이드 표적 T 세포 수용체를 특이적으로 발현하는 CD8+ T 세포의 상호 작용 후 in vitro 확장은 이 CD8+ T 세포 집단의 농축 및 확장을 초래합니다.

이 비디오는 나선형 채널이 있는 미세유체 장치를 사용하여 기관 분비물에서 호중구를 분리하는 방법을 보여줍니다. 이 장치는 다양한 두께와 사다리꼴 모양의 채널을 활용하여 세포 크기에 따라 효율적인 분리를 달성합니다. 힘 간의 상호 작용으로 인해 큰 호중구가 내벽 근처에 축적되는 반면 적혈구와 뮤신 응집체는 외벽 근처에 남아 효과적인 호중구 분리를 보장합니다.

이 비디오에서는 비침습적 양전자 방출 단층 촬영 이미징을 위해 방사성 동위원소 접합 단클론 항체를 사용하여 T helper cell의 세포 내 방사선 표지를 시연합니다.