Isolation of Peripheral Blood Mononuclear Cells from Human Buffy Coats

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초록

이 비디오에서는 밀도 구배 원심분리를 통해 인간 버피 코트에서 단핵구와 림프구를 포함하는 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs)를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 PBMC는 추가 분석에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 미디어 준비

참고: 모든 시약 및 소모품에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나와 있습니다.

RPMI 완전 배지: RPMI 1640에 피루브산나트륨 1mM, L-글루타민 2mM, HEPES 10%, 열 비활성화 소 태아 혈청(FBS) 10%를 보충합니다. Mtb 감염으로 작업할 때 세포 배양 배지에서 항생제를 사용하지 마십시오.
무혈청 RPMI 배지: RPMI 1640에 1mM 피루브산 나트륨, 2mM L-글루타민 및 10mM HEPES를 보충합니다.

2. 버피 코트에서 말초 혈액 단핵 세포 분리

참고: 클래스 II 생물 안전 캐비닛 내에서 인간의 혈액(잠재적으로 전염성)에 대한 모든 작업을 수행하십시오. 버리기 전에 소독제로 15분 동안 잔류 혈액 제....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호
림프렙	알레르 테크놀로지스 AS	11508545
RPMI 1640	생명 기술 공사	SH30096.01
EDTA (0.5 M)	카롤린스카 대학 병원, Huddinge	해당 사항 없음
나-피루브산	GE 헬스케어 생명과학	SH300239.01
L-글루타민	GE 헬스케어 생명과학	SH30034.01
헤페스	GE 헬스케어 생명과학	SH30237.01
소 태아 혈청(FBS)	시그마-알드리치	F7524

년 월

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