In vitro Generation of Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors(일반 림프구 전구 세포에서 Plasmacytoid 수지상 세포의 체외 생성)

초록

출처: Chang, S., et al. AC-6 피더 시스템을 사용하여 일반적인 림프구 전구 세포에서 쥐 plasmacytoid 수지상 세포의 체외 생성. J. Vis. 특급 (2015년)

이 동영상은 일반적인 림프구 전구 세포(CLP)에서 형질세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC)를 생성하는 체외 분석을 보여줍니다. Fms-like tyrosine kinase-3 ligand(FL)가 있는 상태에서 γ조사된 공급 세포와 함께 정제된 CLP를 공동 배양하면 CLP는 비부착성 pDC로 분화되며, 유세포 분석을 사용하여 그 존재를 확인합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. AC-6 피더 셀의 준비

참고: AC-6.21(줄여서 AC-6) 기질 세포주(스탠포드 대학의 I. Weissman 제공)는 15% 열 비활성화 소 태아 혈청(FBS)이 보충된 RPMI로 유지되어야 합니다. 공급세포(feeder cell) 역할을 하기 위해 AC-6 세포는 증식을 방지하기 위해 공동 배양 하루 전에 3,000 rad(30Gy)를 γ 조사합니다. AC-6 세포는 유지 관리 중에 과밀하게 방치되거나 통과 수가 20 이상인 경우 분화 지원 능력을 잃는 경향이 있습니다.

1. AC-6 세포를 1ml Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)로 한 번 세척하고 흡인으로 DPBS를 제거합니다. AC-6 세포를 0.8ml 트립신 용액(DPBS의 0.05% 트립신 및 0.5mM EDTA)으로 37°C, 5% CO₂에서 3-5분 동안 처리한 다음 10부피의 배양 배지로 희석하여 반응을 중지하여 단일 세포 현탁액을 만듭니다.
2. AC-6 세포를 5.....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
안티 마우스 Ly6g / Ly6c (PE), 클론 RB6-8C5	바이오레전드	108408	리니지 마커
안티 마우스 NK1.1 (PE), 클론 PK136	바이오레전드	108708	리니지 마커
안티 마우스 CD11b(PE), 클론M1/70	바이오레전드	101208	리니지 마커
안티 마우스 CD19(PE), 클론 eBio1D3	바이오레전드	115508	리니지 마커
안티 마우스 B220 (PE), 클론 RA3-6B2	바이오레전드	103208	리니지 마커/FACS
안티 마우스 CD3 (PE), 클론 17A2	바이오레전드	100308	리니지 마커
안티 마우스 CD8a (PE), 클론 53-6.7	바이오레전드	100707	리니지 마커
안티 마우스 MHC-II(PE), 클론 NIMR-4	바이오레전드	107608	리니지 마커
안티 마우스 Ter119 (PE), 클론 TER-119	바이오레전드	116208	리니지 마커
안티 마우스 Thy1.1 (PE), 클론 HIS51	이바이오사이언스	Tel.: 12-0900-83	리니지 마커
안티 마우스 M-CSFR (APC), 클론 AFS98	바이오레전드	135510	팩스
안티 마우스 c-Kit(PerCP/Cy5.5), 클론 2B8	바이오레전드	105824	팩스
안티 마우스 Sca-1 (FITC), 클론 D7	바이오레전드	108106	팩스
안티 마우스 IL-7Ra (PE / Cy7), 클론 A7R34	바이오레전드	135014	팩스
안티 마우스 CD11c(PerCP/Cy5.5), 클론 N418	바이오레전드	117328	팩스
안티 마우스 CD11b (FITC), 클론 M1/70	바이오레전드	101206	팩스
FACS리아 III	BD 바이오사이언스		셀 분류기
FACS 선별 튜브	BD 바이오사이언스	352054
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