$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. 양성 선택을 이용한 미세 기포를 가진 T 세포 분리
참고: 이 프로토콜은 SAMB를 사용하는 소규모 CD3+ 양성 선택 접근 방식에 대해 자세히 설명합니다.
- 시중에서 판매되는 PBMC를 2.5mL의 분리 완충액에 3 x 108 세포당 25ng의 항체 농도로 biotinylated anti-CD3(OKT3) 항체와 함께 배양합니다. 피펫팅을 위아래로 하여 부드럽게 혼합하고 실온에서 10분 동안 배양합니다.
- 제조업체가 보고한 SAMB 농도에 따라 0.5(SAMB 수량):1(세포 수량)의 비율로 스트렙타비딘 마이크로버블(SAMB)을 추가합니다.
- 시판되는 EOE(End-over-End) 회전기를 사용하여 실온에서 10-15분 동안 20rpm으로 혼합합니다. 실온에서 400 x g에서 5분간 원심분리기.
- 원심분리 후, 긍정적으로 선택된 세포는 SAMB와 함께 현탁액의 맨 위에 있게 됩니다. 선택되지 않은 나머지 세포는 튜브 하단의 세포 펠릿에 있습니다. 9인치 유리 피펫을 사용하여 버블 셀 층 아래의 팁을 튜브 바닥에 삽입하고 전자 피펫으로 세포 펠릿과 부동....