부력 활성화 세포 분류를 사용한 부유 선광 기반 T 세포 분리

초록

출처: Snow, T., et al. 마이크로버블을 사용한 인간 말초 혈액 단핵 세포 샘플에서 부유 선광 기반 T 세포 분리, 활성화 및 확장. J. Vis. 특급. (2022년)

이 비디오는 기능화된 부력 활성화 세포 분류(BACS) 기술을 사용하여 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 T 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리 기술은 세포에 비오틴화된 항-CD3 항체를 표지하고 스트렙타비딘 결합 마이크로버블을 사용하여 항체 결합 세포를 분리하여 CD3+ T 세포를 긍정적으로 선택하는 것을 포함합니다.

프로토콜

1. 양성 선택을 이용한 미세 기포를 가진 T 세포 분리

참고: 이 프로토콜은 SAMB를 사용하는 소규모 CD3⁺ 양성 선택 접근 방식에 대해 자세히 설명합니다.

1. 시중에서 판매되는 PBMC를 2.5mL의 분리 완충액에 3 x 10⁸ 세포당 25ng의 항체 농도로 biotinylated anti-CD3(OKT3) 항체와 함께 배양합니다. 피펫팅을 위아래로 하여 부드럽게 혼합하고 실온에서 10분 동안 배양합니다.
2. 제조업체가 보고한 SAMB 농도에 따라 0.5(SAMB 수량):1(세포 수량)의 비율로 스트렙타비딘 마이크로버블(SAMB)을 추가합니다.
3. 시판되는 EOE(End-over-End) 회전기를 사용하여 실온에서 10-15분 동안 20rpm으로 혼합합니다. 실온에서 400 x g에서 5분간 원심분리기.
4. 원심분리 후, 긍정적으로 선택된 세포는 SAMB와 함께 현탁액의 맨 위에 있게 됩니다. 선택되지 않은 나머지 세포는 튜브 하단의 세포 펠릿에 있습니다. 9인치 유리 피펫을 사용하여 버블 셀 층 아래의 팁을 튜브 바닥에 삽입하고 전자 피펫으로 세포 펠릿과 부동액을 흡인하고 새 튜브로 옮깁니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Biotin anti-human CD3 (OKT3) 항체	바이오레전드	317320
루코팩	바이오아이비티	HUMANLMX100-0001129
일반 인간 PBMC	바이오아이비티	HUMANHLPB-0002562
Streptavidin Microbubble Kit (아카데미의 분리 완충액 포함)	아카데미움	제11110-000

호