Isolation of Marginating Hepatic Leukocytes from a Mouse Liver(마우스 간에서 간 백혈구 가장자리 분리)

초록

출처: Sorski, L., et al. Marginating-hepatic Leukocytes의 선택적 수확. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오에서는 강제 관류에 의해 쥐의 간에서 변두리 간 백혈구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 프로토콜

1. 간의 관류 및 MH-백혈구 수집
   1. 8% 이소플루란을 과다 투여한 동물을 안락사시킵니다. 예방 조치로, 이소플루란이 적신 패드가 들어 있는 15ml 튜브를 흉강이 열릴 때까지 마우스의 머리 주위에 놓습니다.
   2. 마우스의 팔다리를 침대에 고정하십시오.
   3. 복막과 흉강을 열어 호흡이 멈추는 즉시 간과 심폐 복합체를 노출시키고 횡격막의 아래쪽 측면을 그대로 유지합니다(배출하는 흉강 풀을 만들기 위해). 이 과정에서 출혈을 피하십시오.
      1. 구체적으로는 내부 장기를 손상시키지 않고 하복부 정중선 지점에서 절개를 시작하여 갈비뼈를 향해 대각선으로 양쪽으로 진행하여 흉강 상부 수준까지 절단합니다.
   4. 내장을 뽑아서 동물 바깥쪽의 실험자 오른쪽에 놓아 문맥을 노출시킵니다.
   5. 연동 펌프에 연결된 30g의 바늘을 비장 정맥의 문맥 로스트랄에 삽입합니다.
   6. 횡격막 위의 하대정맥을 절단하여 흉강에서 관류액을 배출하고 수집할 수 있도록 합니다.
   7. 약 3ml/분의 속도로 연동 펌프를 켜고 흉강 수영장에서 혈액으로 오염된 처음 3ml의 퍼퓨세이트를 부드럽게 수집합니다.
   8. 이 퍼퓨세이트를 버리십시오. 필요한 경우 식염수를 사용하여 이러한 세척을 다시 반복 한 다음 간 관류 물을 수집하기 시작하십시오.
   9. 최대 4ml/분의 속도로 관류를 다시 시작하고 주사기에 연결된 나비를 사용하여 흉강에서 10ml의 관류물을 수집합니다.
   10. 간의 색이 밝은 갈색으로 변하면 관류를 종료합니다.

2. 백혈구 추출

1. 관류액을 400 x g에서 10분 동안 원심분리합니다.
2. 상층액을 흡인합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Autoclud 연동 펌프
나비 바늘	세상에,		26지
나비 바늘	세상에,		21G * 3 / 4 인치
주사기	Pic 솔루션		1 밀리리터
주사기	Pic 솔루션		2.5 밀리리터
주사기	Pic 솔루션		5 밀리리터
주사기	Pic 솔루션		10 밀리리터
주사기	Pic 솔루션		25 밀리리터
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