유세포 분석법을 통한 인간 사이토카인 유도 킬러 세포의 CD 마커 인식

초록

출처: Hsiao, C. H., et al. 암 치료를 위한 세포독성 사이토카인 유도 킬러 T 세포의 분리 및 확장. J. Vis. 특급 (2020년)

이 비디오에서는 말초 혈액 단핵 세포 배양에서 확장된 사이토카인 유도 킬러 T 세포, CIK 세포의 비율을 결정하기 위한 유세포 분석 기반 기술을 보여줍니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. CIK 유도 및 확장

1. 0일차에 37°C 및 5% CO₂의 가습된 세포 배양 인큐베이터에서 24시간 동안 1,000IU/mL의 IFN-γ를 포함하는 신선한 기저 배지에서 PBMC(1 x 10⁶)를 배양합니다.
2. 1일차에 항-CD3 항체 50ng/mL, rh IL-1α 1ng/mL 및 rh IL-2 1,000U/mL를 함유한 새로운 기저 배지로 배지를 새로 고칩니다. 3일마다 매체를 새로 고칩니다.
3. 7일차에 1,000 U/mL의 rh IL-2를 함유한 새로운 기저 배지로 배지를 새로 고칩니다. 세포 확장이 끝날 때까지 3일마다 배지를 새로 고칩니다(14일차).

2. CIK 세포 평가를 위한 면역표현형 분석

1. CIK 세포를 10mL의 멸균 PBS로 세척합니다. 300 x g 및 18−20 °C에서 10분 동안 원심분리기를 하고 상층액을 흡입하고 10....

결과

그림 1: 대표적인 PBMC 샘플에서 CD3⁺CD56⁺ T 세포의 비율.(A) 림프구는 특정 크기와 입도에 의해 인식되었습니다. 유세포분석법을 통한 분석을 위해 선택된 단일 세포 집단. (B) 3명의 건강한 기증자로부터 CIK 확장 효능에 대한 통계적 분석을 t-테스트(*, p < 0.01)를 사용하여 수행했습니다.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
APC Mouse Anti-Human CD56 항체	BD (영어)	555518	나159
APC 마우스 IgG1, κ 아이소타입 컨트롤	BD (영어)	555751	MOPC-21
BD FACSCanto II 유세포 분석기	BD (영어)	338962	SN: R33896202856
둘베코의 개조된 독수리 미디엄/F12	하이클론	SH30023.02	OC-3 세포 배양을 위한 기초 배지
소 태아 세럼	하이클론	SH30084.03	K562 및 OC-3 세포 배양용. 완전 배지에는 FBS의 10%가 포함되어 있습니다.
Ficoll-Paque 플러스	GE 헬스케어 생명과학	71101700-EK	밀도 구배 용액
FITC Mouse Anti-Human CD3 항체	BD (영어)	555332	우흐트1
FITC 마우스 IgG1, κ 아이소타입 제어	BD (영어)	555748	MOPC-21
인간 anti-CD3 mAb	타카라	T210	OKT3 2.5mL의 스톡(1mg/1mL)을 50mL의 인덕션 배지에 추가합니다. -80 °C에서 보관 재고
RPMI1640 매체	지브코	11875-085	K562 세포 배양을 위한 기초 배지. 4 °C에서 보관 재고

시리즈 월 시리즈 년