출처: Hoffmann, S. H. L., et al., Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT. J. Vis. Exp. (2017)
이 비디오에서는 비침습적 양전자 방출 단층 촬영 이미징을 위해 방사성 동위원소 접합 단클론 항체를 사용하여 T helper cell의 세포 내 방사선 표지를 시연합니다.
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방법 논문
Radiolabeled 단클론 항체를 사용한 Murine T Helper 림프구 라벨링
787 조회수
⸱
2025년 7월 8일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. cOVA-TH1 세포 방사성 표지
참고: 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb는 배양된 cOVA-TH1 세포에 적용되어 세포 내 방사성 표지를 가능하게 합니다.
- cOVA-TH1 세포 방사성 표지의 경우, 선량 보정기를 사용하여 방사성 표지된 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 37MBq를 데드 볼륨이 없는 주사기에 추출합니다. 식염수 1mL를 추가하여 37MBq/mL 용액을 받습니다.
- 2 x 106 cells/mL의 배지에서 cOVA-TH1 세포를 현탁하고 48웰 플레이트의 각 웰에 0.5mL의 세포 현탁액을 추가합니다.
- 갓 준비한 37MBq/mL 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 용액 20μL를 48웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 라벨링의 최종 비율은 520μL의 부피에서10 6 개 세포 당 0.7MBq입니다. 37 ° C 및 7.5 % CO2에서 30 분 동안 배양합니다.
- 배양 후 각 웰의 세포를 조심스럽게 재현탁시키고 48웰 플레이트의 세포 현탁액을 50mL 스크류 캡 튜브로 옮깁니다. 세포 손실을 최소화하려면 미리 예열된 배지로 각 웰을 헹굽니다.
- cOVA-TH1 세포 현탁액을 400 x g에서 5분 동안 원심분리하고, 상층액을 버리고, 10mL 예열된 PBS에 세포를 재현탁합니다. 세포 계수를 위해 세포 현탁액의 부분 표본을 제거합니다. 세탁 단계를 반복합니다.
- 트리판 블루 염색으로 적절한 희석으로 생존 가능한 cOVA-TH1 세포를 계산합니다.
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공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 64Cu 워크업 모듈 | WKL (위클 | 맞춤 제작 | 64Cu 생산 |
| 용량 교정기 | 카핀텍 | CRC-25R | |
| PETtrace 사이클로트론 | 제너럴 일렉트릭 의료 시스템 | ||
| 도타-NHS | 매크로사이클릭(Macrocyclics) | 나-280 | |
| cOVA-TCR 항체 (KJ1-26) | 하이브리도마 세포 배양에서 분리 | DOTA 활용 | |
| 나2HPO4 | 시그마-알드리치 | 71633 | DOTA 활용 |
| H+ 첼렉스 100 | 시그마-알드리치 | C7901 | DOTA 활용 |
| Amicon Ultra-15 필터 유닛 | 머크 밀리포어 | UFC910008 | DOTA 활용 |
| 로티푸란 초순수 | 칼 로스 | HN68.3 | DOTA 활용 |
| 암모늄 아세테이트 | 시그마-알드리치 | 32301 | DOTA 활용 |
| PBS (PBS) | 대학 Tuebingen | DOTA 활용 | |
| Micro Bio-spin P-6 컬럼 | Bio-Rad 연구소 | 7326221 | DOTA 활용 |
| 구연산나트륨 | 시그마-알드리치 | 71497 | DOTA 활용 |
| 사이클론 플러스 인광이미저 | 퍼킨 엘머 | L2250116 | DOTA 활용 |
| DMEM을 참조하십시오. | 머크 밀리포어 | 102568 | T 세포 배지용 성분 |
| 증권 시세 | 머크 밀리포어 | S0115/1004B | T 세포 배지용 성분 |
| 나트륨 피루브산 | 머크 밀리포어 | L0473 | T 세포 배지용 성분 |
| MEM- 아미노산 | 머크 밀리포어 | K0293 | T 세포 배지용 성분 |
| 헤페스 | 머크 밀리포어 | 패 1613 | T 세포 배지용 성분 |
| 페니실린/스트렙토마이신 | 머크 밀리포어 | A2212 | T 세포 배지용 성분 |
| 0.05mM 2-β-메르캅토에탄올 | 시그마-알드리치 | M3148 | T 세포 배지용 성분 |
| DO11.10 마우스 | 자체 사육 | TH1 세포 배양 | |
| 디피에스 | 지브코 | 14190144 | TH1 세포 배양 |
| 셀 스트레이너 40 μm | 코 닝 | 352340 | TH1 세포 배양 |
| ACK 용해 버퍼 | 론자 | 10-548E | TH1 세포 배양 |
| CD4 MicroBeads, 마우스 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-097-145 | TH1 세포 배양 |
| QuadroMACS 분리기 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-090-976 | TH1 세포 배양 |
| LS 칼럼 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-042-401 | TH1 세포 배양 |
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