생체 외 이미징을 위해 쥐 슬와골 배출 림프절을 채취하는 해부 방법

초록

출처: Rezende, R. M., et al. Ex-Vivo Confocal Microscopy를 사용한 림프절 구조 및 세포 국소화 시각화. J. Vis. 특급 (2019년)

이 비디오는 쥐의 뒷다리에서 슬와골 배출 림프절을 채취하는 해부 기술을 보여줍니다. 림프절은 선천성 면역과 적응 면역을 연결하는 데 중요한 역할을 하며, 보존된 조직 구조와 세포 생존력을 가진 온전한 림프절을 채취하면 국소 및 전신 면역 반응을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 슬와골 배출 림프절을 제거하는 수술 절차

1. CO₂ 질식 후 자궁 경부 탈구를 사용하여 마우스를 안락사시킵니다.
2. 접착 테이프로 아크릴 스테이지의 엎드린 위치에 있는 마우스를 고정시키고 종아리와 무릎에 면봉으로 미네랄 오일을 바릅니다(그림 1A-D).
3. 발뒤꿈치부터 무릎까지 종아리의 정중선 절개를 수행합니다(그림 1E, F).
4. 종아리 근육 조직을 피부에서 분리시킵니다(그림 1F, G).
5. 슬와와를 노출시킵니다(그림 1G). 슬와골 림프절은 슬와골(popliteal fossa)에서 반투명한 구체로 나타납니다.
6. 미세 수술 곡선 겸자를 사용하여 슬와골 림프절을 제거합니다(그림 1G).
7. 또는 누운 자세에서 마우스를 뒤집고 발뒤꿈치에서 무릎까지 종아리의 정중선 절개를 수행한 다음 종아리 근육을 피부에서 분리하여 슬와골 LN 제거를 위해 대퇴이두근과 반건근 사이의 슬와두근에 접근합니다.
   메모: 슬와와(Popliteal fossa)는 무릎 관절 뒤쪽에 위치한 얕은 함몰부입니다. 조심스럽게 열어 슬와골 림프절을 확인합니다.

결과

그림 1: 슬와골 림프절 준비. (가, 나) FACS 항체 마스터 믹스를 발 패드에 피하 주사. (C, D) 주사 후 3 시간 후 마우스를 안락사시키고 접착 테이프 (C)로 아크릴 판에 마우스를 고정시키고 절개 부위 (D) 주위에 털이 침착되는 것을 방지하기 위해 복부 피부에 미네랄 오일을 도포합니다. (E) 발뒤꿈치부터 무릎까지 종아리의 정중선 절개를 시행합니다. (F) 슬와골을 노출시킵니다. (G) 미세수술 구부러진 겸자를 사용하여 슬와골 림프절을 제거합니다. (H) 장기를 페트리 접시에 넣고 장기를 둘러싼 지방을 제거하고, 장기를 페...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Cellview 배양 접시	그라이너-바이오	627861	35x10mm(바닥 유리 포함
킴와이프	Kimtech 과학 브랜드	7557	크기 : 21 x 20cm / 상자 당 100 장
미세 수술 곡선 겸자	WEP 수술 기구	주문 제작	12.5 cm
미세 수술 곡선 가위	WEP 수술 기구	주문 제작	11.5 cm

) 호