면역 복합체를 사용한 수지상 세포 활성화에 대한 유세포 분석 기반 분석

Abstract

출처: Santana-Magal, N., et al. Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes(마우스 단핵구 유래 수지상 세포의 분리 프로토콜 및 종양 면역 복합체를 사용한 후속 체외 활성화).J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오는 면역글로불린 G(IgG)로 코팅된 종양 세포를 사용하여 수지상 세포의 활성화를 평가하는 프로토콜을 보여줍니다. 수지상 세포는 IgG로 코팅된 종양 세포를 내부화하고, 종양 항원을 처리하고, 공동 자극 분자 CD86의 공동 발현과 함께 MHC-II 분자를 통해 표면에 존재합니다. 그런 다음 이러한 수지상 세포는 MHC-II 및 CD86 표적 면역 염색 및 유세포 분석 분석을 거쳐 활성화 상태를 확인합니다.

Protocol

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 종양 관련 단핵구 유래 수지상 세포의 분리

1. 층류 후드에서 CO₂ 안락사된 마우스의 종양을 제거하고 소 태아 혈청(FBS)이 없는 RPMI 배지에 종양을 배치합니다.
   메모: 종양을 제거하기 전에 쥐를 면도하고 70% 에탄올을 분사하는 것이 털로 인한 잠재적인 오염을 최소화하는 것이 좋습니다. 종양이 25 - 40 mm²를 넘지 않도록 해야 하는데, 종양이 클수록 연약하고 세포가 사멸하기 쉬운 수지상 세포(DC)가 적기 때문이다. 더 많은 수의 DC가 필요한 경우 각 마우스에 여러 부위에 종양 세포를 주입할 수 있습니다.
2. 멸균 된 층류 후드 아래에서 수술 가위를 사용하여 종양을 작은 조각 (약 1 x 1 mm²)으로 자릅니다.
   1. 한 마우스의 모든 종양 조각을 5mL의 Hank's balanced salt solution(HBSS), 2mg/mL 콜라겐분해효소 IV 및 0.01mg/mL DNase I.
      가 들어 있는 마그네틱 교반 막대가 있는 30mL 멸균 평면 바닥 튜....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ficoll-Paque 프리미엄	GE-헬스케어	Tel.: 17-5442-02
옵티프렙	스템셀 기술	7820
CD45 마이크로비즈	밀테니	Tel.: 130-052-301
EasySep 단핵구 분리 키트	스템셀 기술	19861
콜라겐분해효소 IV	시그마	C9697-50MG	각 로트의 내독소 검사
DNase I	시그마	DN25-10MG
HBSS (하이브에스)	써모피셔	14025092
FBS(증권 시세	써모피셔	16140071	각 로트의 내독소 검사
PE-CD11c	바이오레전드	117307
APC-CD11b	바이오레전드	101211
브릴리언트 바이올렛 650 MHCII	바이오레전드	107641
AF48- CD86	바이오레전드	105017
APC/Cy7-Ly-C6	바이오레전드	108423
PE / Cy7-CD15	바이오레전드	135523