제대혈 조혈 줄기세포를 분리하여 인간 면역계 마우스를 생성하다

초록

출처: Lanis, JM, et al. 인간 종양을 지닌 인간화 마우스 모델에서 암 면역 치료제 테스트. J. Vis. 특급 (2022)

이 비디오는 인간 면역 체계(HIS) 마우스를 생성하는 기술을 보여줍니다. CD34⁺ 조혈모세포(HSC)는 항체로 코팅된 마그네틱 비드를 사용하여 인간 제대혈 버피 코트 세포에서 분리됩니다. CD34⁺ HSC는 사이토카인이 풍부하고 동결 보존된 성장 배지에서 확장됩니다. 마지막으로, 해동된 HSC를 면역결핍 새끼 마우스에 주입하여 HIS 마우스 모델을 확립합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다. 동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. HIS 마우스의 세대

1. BALB/c -Rag2^null Il2RγC^null Sirpα^NOD (BRGS) 마우스의 마우스 축산
   메모: 이 균주는 T, B 또는 자연살해(NK) 세포가 없는 극도로 면역 결핍입니다. 따라서 기회 감염을 방지하기 위해 엄격한 조치를 취해야 합니다. 트리메토프림(trimethoprim)과 설파디아진(sulfadiazine)이 함유된 식단을 2주 일정으로 일반 식단과 번갈아 가며 식단을 유지합니다. 가능한 최고 수준의 예방 조치 하우징 룸(예: 접근이 제한된 배리어 샤워실)을 유지하십시오.
   1. BALB/c, -Rag2,^null, Il2RγC^{, null}, Sirpα^NOD (BRGS) 및 BALB/c, Rag2,^null, Il2RγC^{, null....}

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1mL 주사기(바늘 포함)	맥케슨	1031815
15 mL 튜브	그르니에 바이오 원	188271
2-메르캅토에탄올	시그마	M6250
50 mL 튜브	그르니에 바이오 원	227261
AutoMACS Pro 분리기	밀테니	Tel.: 130-092-545
증권 시세	피셔 사이언티픽	BP1600100
칠 15 랙	밀테니	Tel.: 130-092-952
배아 줄기세포 FCS	지브코	10439001
Eppendorf Tubes; 1.5 mL 용량	그르니에 바이오 원	616201
뛰어나다	마이크로소프트
FBS(증권 시세	벤치 마크	100-106 500ml
피콜 히파크	GE 헬스케어	45001752
유리 피펫	DWK 생명과학	재질 보기 63A53
HBSS w/ Ca & Mg	시그마	55037씨
멀티라드 350	정밀 X-Ray
PBS (PBS)	코 닝	45000-446
프리즘	그래프패드
렉 후 FLT3L	R&D 시스템	308-FK-005/CF
렉 후 IL6	R&D 시스템	206-IL-010/CF
렉 후 SCF	R&D 시스템	255SC010
혈청학적 피펫 25 mL	피셔 사이언티픽	1367811
멸균 필터	날진	567-0020
멸균 분자수	시그마	7732-18-5
예티 세포 분석기	바이오 라드	12004279

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