인간 PBMC가 이식된 인간화 이종이식 마우스 모델을 생성하는 기술

초록

출처: Li, Z., et al. A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 인간화된 이종 이식 마우스 모델을 생성하기 위한 분석을 보여줍니다. 면역이 저하된 마우스에게 시클로포스파마이드를 주사하여 면역 세포를 고갈시킵니다. 하이드로겔에서 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 혼합된 환자 유래 종양 세포를 마우스에 피하 주입하여 T 세포가 침투하는 종양을 형성합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다. 동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. Human PBMC 기반 모델 구축

1. cyclophosphamide를 사용한 NOD/SCID 마우스의 골수절제술: 최적 용량 결정
   1. 암컷 비만하지 않은 당뇨병/중증 복합 면역결핍증(NOD/SCID) 마우스(6-8주)를 구입하십시오.
      메모: 이 연구에 참여한 모든 쥐는 여성이었다.
   2. 식염수에 다양한 용량(50, 100 및 150mg/kg)으로 시클로포스파마이드(CP)를 준비합니다. 125mg/kg.
      의 식염수 중 0.8% Tween-80의 디설피람(DS)을 준비합니다. 참고 : CP의 다른 용량을받는 마우스에 동일한 부피의 약물 용액을 투여 할 수 있도록 CP의 다른 농도를 준비했다.
   3. CP(복강내, i.p.)와 DS(peroral, p.o.)가 있는 동물을 하루에 한 번씩 2일 동안 치료합니다. CP.
      의 각 투여 후 DS (....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PBMC 분리/세포 배양
히스토파크-1077	시그마	10771	세포 분리
DMEM을 참조하십시오.	코 닝	10-013-CVR	세포 배양
디피에스	코 닝	21-031-CVR	세포 배양
FBS(증권 시세	코 닝	35-076-이력서	세포 배양
페니실린-스트렙토마이신, 액상	지브코	15140-163	세포 배양
트립신-EDTA (0.25%), 페놀 레드	지브코	25200-114	세포 배양
마트리겔	코 닝	356237	CDX 접종
FACS 분석
소 췌장에서 추출한 Deoxyribonuclease I	시그마	DN25	시료 전처리
콜라겐 분해 효소 유형 I	시그마	C0130	시료 전처리
Anti-mouse/human CD11b (M1/70) 항체	바이오레전드	101206	팩스
안티-마우스 Ly-6C (HK1.4) 항체	바이오레전드	128008	팩스
안티-마우스 Ly-6G (1A8) 항체	바이오레전드	127614	팩스
Anti-human CD8 (OKT8) 항체	선진 바이오텍	H10082-11H	팩스
Anti-human CD279 (MIH4) 항체	이바이오사이언스	Tel.: 12-9969-42	팩스
Anti-human CD3 (HIT3a) 항체	4A 생명 공학	--	팩스
Guava easyCyte 8HT 벤치탑 유세포 분석기	밀리포어	제0500-4008	팩스
종양/PDX 주입/투여/측정
시클로포스파미드	제이&케이	고양이#419656, CAS#6055-19-2	In vivo 효능
디설피람	제이&케이	고양이#591123, CAS#97-77-8	In vivo 효능
주사기	BD (영어)	300841	CDX 접종
피하 주사 바늘 (14G)	Shanghai SA Mediciall & Plastic Instruments Co., Ltd. (상하이 SA 메디시얼 & 플라스틱 인스트루먼트 Co., Ltd.)	0.7*32 TW SB	PDX 접종
버니어 캘리퍼스 (MarCal)	마흐	16ER	종양 측정
IVC 개별 환기 케이지	Lingyunboji 주식 회사	IVC-128	동물 시설

년 표시기 년 년 호 (영문)