바이러스 항원 특이적 T 세포를 이용한 B형 간염 바이러스 복제 억제

Abstract

출처: Xiong, X., et al. 줄기 세포 유래 바이러스 Ag 특이적 T 림프구는 마우스에서 HBV 복제를 억제합니다. J. Vis. Exp. (2019).

이 비디오는 인간 유도 만능 줄기 세포(iPSC) 유래 CD8+ T 세포를 사용하여 마우스에서 B형 간염 바이러스(HBV) 복제를 억제하는 분석을 보여줍니다. HBV 특이적 수용체로 조작된 이 T 세포는 형질전환 마우스로 전달됩니다. 그런 다음 복제 가능한 HBV 게놈 플라스미드를 간에 직접 주입하여 바이러스 DNA 흡수를 가능하게 합니다. 바이러스 항원이 하이브리드 MHC-I 분자에 의해 발현되고 제시되면 조작된 T 세포는 이러한 복합체를 인식하고 결합합니다. 이는 세포독성 분자의 방출을 유발하여 HBV에 감염된 간 세포를 파괴하고 바이러스 복제를 억제합니다.

Protocol

동물 모델과 관련된 모든 절차는 local
에서 검토했습니다. 기관 동물 관리 위원회 및 JoVE 수의학 검토 위원회. 샘플 수집과 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. iPSC(iPSC-CD8⁺ T 세포)에서 바이러스 Ag 특이적 CD8⁺ T 세포 생성

1. 레트로바이러스 구조체의 생성
   메모: T 세포 수용체(TCR) α 및 β 유전자는 2A 자가 절단 서열과 연결되어 있습니다. 레트로바이러스 벡터 MSCV-IRES-DsRed(MiDR)는 DsRed+입니다.
   1. 서브클론 HBs183-191(FLLTRILTI) 특이적 A2 제한 인간-쥐 하이브리드 TCR(s183 TCR) 유전자(Vα34 및 Vβ28)를 MiDR에 넣어 s183 MiDR 구조물을 생성합니다(그림 1A).
2. 레트로바이러스 형질도입
   참고: Platinum-E(Plat-E) 세포는 레트로바이러스 형질도입에 사용될 레트로바이러스(s183 TCR 유전자 운반)를 포장하는 데 사용됩니다. ....

Results

그림 1: HBV 바이러스 Ag 특이적 iPSC-CD8⁺ T 세포의 생성.

마우스 iPSC는 HBs183-91 TCR (MiDR-s183 TCR) 또는 OVA257-264 TCR (MiDR-OVA TCR)과 같은 레트로바이러스 구축물로 형질도입되고, 형질도입된 iPS세포는 T 계통 분화를 위해 OP9-DL1/DL4 간질 세포와 공동 배양된다. (A) s183 특이적 TCR을 발현하는 레트로바이러스 구조물 MiDR-s183 TCR의 개략도. Ψ = 포장 신호; 2A = 피코나바이러.......

Materials