Effector T 림프구를 인간 뇌종양을 운반하는 마우스에 전달

초록

출처: Jarry, U., et al. Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts. J. Vis. 특급. (2018).

이 비디오는 인간 뇌종양을 운반하는 쥐 모델에 인간 효과기 T 림프구를 투여하는 입체 주사 기술을 보여줍니다. 종양이 있는 마취된 마우스를 정위 프레임에 배치하고 두개골의 주입 위치에 버 구멍을 만들면 종양 부위에 effector T 림프구를 주입합니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다. 동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포독성 효과기 T 림프구의 비특이적 확장

1. 35 Gy에서 공급세포를 준비하고 조사합니다. 2 x 10⁵ - 4 x 10⁵ effector cell의 자극을 위해 3개의 뚜렷한 건강한 donor로부터 10 x 10⁶ peripheral-blood mononuclear cells (PBMC) 및 1 x 10⁶ B-lymphoblastoid cell line (BLCLs)을 준비합니다.
2. 10% 열 비활성화 태아 송아지 혈청(FCS), 2mM L-글루타민, 페니실린(100 IU/mL) 및 스트렙토마이신(0.1 μg/mL) 및 300 IU/mL 재조합 인터루킨-2(IL-2)가 보충된 15mL의 Roswell Park Memorial Institute 배지(RPMI)에 공급세포와 효과기 세포를 모두 재현탁합니다.
3. 최종 농도 1μg/mL에서 파이토헤마글루티닌(PHA-L)을 추가하고, 조심스럽게 혼합한 ....

결과

그림 1: 쥐 두개골의 주요 해부학적 랜드마크 사진. 여기에는 시상(빨간색 선) 및 관상동맥(파란색 선) 봉합사와 주사 부위의 방향을 잡는 데 사용되는 교차점(Bregma)이 포함됩니다. 축척 막대가 표시됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PBMC			3명의 다른 건강한 기증자로부터
BLCL			3명의 다른 기부자로부터
로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트 미디엄 (RPMI)	지브코	31870-025
증권 시세	더처	S1810-500
L-글루타민	지브코	제25030-024
페니실린/스트렙토마이신	지브코	15140-122
일리노이 -2	노바티스	프롤루킨
PHA-엘	시그마	엘4144
입체식 프레임	Stoelting Co.	51600
입체식 프레임을 위한 마우스 어댑테이터	Stoelting Co.	51624
마이크로 주사기 펌프 인젝터	WPI (영어)	UMP3-4 (영어
NanoFil 주사기	WPI (영어)	NF34BV-2
NSG 마우스	찰스 리버	NSGSSFE07S
케타민	메리알	이말젠 1000
자일라진	바이엘	롬푸르 2%
가위	WPI (영어)	201758
집게	WPI (영어)	501215
옴니드릴 115/230V	WPI (영어)	503598
빅릴 4-0	에티콘	VCP397H
자일로카인	아스트라제네카	3634461

표시기 시리즈 호 년 년 년 )