혈관화된 이종성 비장 이식의 마우스 모델

초록

출처: Wang, J., et al. 비장 세포 생물학 및 이식 면역 연구를 위한 혈관화된 이소성 비장 이식의 마우스 모델. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 혈관화된 이종성 비장 이식의 마우스 모델을 생성하는 수술 방법을 보여줍니다. 마취된 기증자 마우스의 복강을 외과적으로 열어 비장을 제거합니다. 하대정맥(inferior vena cava)과 대동맥(infrarenal aorata)을 확인하고, 요추 가지를 결찰하고, 선천성 기증자 마우스(congenic donor mouse)의 비장을 이종(heterotopic transplant)으로 이식할 수 있는 구멍을 만듭니다. 혈관 문합을 완료하고 이식된 비장으로의 혈류를 회복시키면 절개 부위를 봉합하고 마우스의 회복을 모니터링합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 외과적 준비, 마취 및 진통제

요법

1. 수술 플랫폼에 멸균 일회용 드레이프(45.7cm x 66cm)를 놓습니다. 마우스를 부드럽게 잡고 마취를 위해 케타민(50mg/kg)과 자일라진(10mg/kg)을 복강내(ip)로 주사하고 진통제를 위해 0.05mg/kg 부프레노르핀을 피하로 주사합니다.
2. 발가락 꼬집기로 마취 깊이를 확인하고 면도기로 복부 전체의 수염을 면도한 다음 6-10x 배율로 작동 현미경 아래 멸균 수술 플랫폼에 마우스를 놓습니다.

2. 기증자 비장 수확

1. 알코올 준비 패드로 복부를 소독하고 수술 테이프로 팔다리를 고정하고 가위로 치골에서 xiphoid process까지 3-4cm의 정중선 수직 피부 절개를 만듭니다.
2. 클립으로 만든 멸균 견인기로 복벽을 집어넣습니다. 멸균 면봉으로 장을 복부의 오른쪽 측면(외과 의사의 왼쪽)으로 이동하여 비장을 노출시킵니다. 비장에 부착된 짧은 위 정맥을 멸균 저온 소작기로 소작합니다(

결과

그림 1: 공여체 비장 채취. (A) 비장에 부착된 짧은 위 정맥을 소작합니다. (B) 비장에 작고 살균된 따뜻한 젖은 거즈를 씌워 촉촉하게 유지합니다. (C) 췌장 뒤의 문맥을 절개하고 분리합니다. (D) 문맥의 곁가지를 결찰하고 비장 정맥 원위부에 있는 문맥 주위에 봉합사를 놓습니다. 점선은 수용자 IVC와의 문합을 위해 나중에 횡단하는 위치를 나타냅니다. (E) 비장을 복부의 오른쪽(외과 의사의 왼쪽)으로 뒤집어 비장 동맥을 포함한 가지와 함께 대동맥과 체강 몸통을 노출시킵니다. (F) 다른 두 가지를 결찰하여 대동맥-체강 -비장 동맥.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
케타민	와이어스	제206205-01
자일라진	로이드 연구소	139-236
헤파린 용액	Abraxis 제약 제품	504031
주입 등급 일반 식염수	주식회사 호스피라	국토교통위원회 0409-4888-20
70% 에탄올	Pharmco 제품 Inc.	111000140
ThermoCare 소동물 ICU 시스템	써모케어, Inc.
애드슨 겸자	Roboz 수술 기구	RS-5230
Derf 바늘 홀더	Roboz 수술 기구	RS-7822
초극세 마이크로 해부 가위	Roboz 수술 기구	RS-5881
마이크로 클립	Roboz 수술 기구	RS-5420
7-0 실크	브레인트리 사이언티픽	SUT-S 103
11-0 나일론에 4mm (3/8) 바늘	샤포인트 DR4	AK-2119
Ms CD45.2 항체	BD 생명과학	553772
Ms CD45.1 항체	BD 생명과학	553776
Ms CD11b 항체	BD 생명과학	557657
Ms B220 항체	BD 생명과학	553089
Ms Ly6C 항체	이바이오사이언스	Tel.: 48-5932-80
Ms Ly6G 항체	BD 생명과학	561236
Ms F4/80 항체	BD 생명과학	565614
Ms CD11c 항체	BD 생명과학	558079
Ms CD3 항체	이바이오사이언스	Tel.: 48-0032-82
Ms CD4 항체	BD 생명과학	552051
Ms CD8 항체	BD 생명과학	563786
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