쥐 모델에서 광범위한 대뇌 피질 탈수초 발생

초록

출처: Üçal, M. et al., 전염증성 사이토카인의 뇌내 주입에 의해 유도된 광범위한 대뇌 피질 탈수초의 쥐 모델. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 대뇌 피질 탈수초화가 널리 퍼진 쥐 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이것은 재조합 미엘린 수초 단백질로 준비된 쥐에 전염증성 사이토카인을 주입하여 혈액-뇌 장벽을 파괴하는 것을 포함합니다. 이 과정은 면역 세포의 침투를 촉진하여 광범위한 대뇌 피질 탈수초를 초래합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 재료 준비

참고: 수술은 무균 상태에서 진행됩니다. 시작하기 전에 드릴 비트를 포함한 모든 수술 기구를 적절한 소독제로 세척해야 합니다.

1. 마취 혼합물을 준비합니다: 펜타닐 0.02mg/mL, 미다졸람 0.4mg/mL, 메데토미딘 0.2mg/mL(혼합물의 최종 농도).
   참고: 대체 마취제에 대해서는 해당 토론 섹션을 참조하십시오.
2. 해독제 혼합물을 준비합니다: 플루마제닐 0.07mg/mL 및 아티파메졸 0.42mg/mL(혼합물의 최종 농도).
3. 카테터와 카테터 캡을 주입구와 나사로 조립합니다. 메스로 카테터를 2mm 길이로 자릅니다(그림 1).
   참고: 가위는 카테터 팁의 원형 단면 모양을 짜거나 왜곡시키므로 이를 위해 사용하지 마십시오.

2. 수술 준비<....

결과

그림 1: 카테터 준비. (A 및 B) 가이드 캐뉼라와 더미 캐뉼라(흡입구가 있는 카테터 캡)가 조립되고 나사로 고정됩니다. (C) 그런 다음 메스를 사용하여 카테터를 2mm 크기로 자릅니다. 현미경 관찰에 따르면 이러한 목적으로 가위를 사용하면 캐뉼라 팁의 원형 모양이 왜곡되므로 피해야 합니다.

그림 2: 카테터의 이식. (A) 수술은 세로.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
성인 수컷 Dark Agouti 쥐 (300 ±25g)
펜타닐	Hameln pharma plus, 독일		펜타닐-시트레이트로서, 50 μg/ml
미다졸람	ERWO Pharma, 오스트리아	50039017	5 mg/ml
메데토미딘	Orion Pharma, 핀란드		메데토미딘 염산염으로서, 1mg/ml
플루마제닐	Roche, 스위스		0.1 밀리그램 / 밀리람베르트
아티파메졸	Orion Pharma, 핀란드		아티파메졸 염산염으로서, 5 mg/ml
10% 포비돈-요오드 복합체	Mundipharma, 오스트리아
치과 용 시멘트	Heraeus Kulzer, 독일	6603 7633
생리식염수	Fresenius Kabi, 오스트리아		0.9% 염화나트륨
인산염 완충 식염수(PBS)	Sigma-Aldrich, 독일	P3813
이소플루오란	AbbVie, 오스트리아
윤활 안약	Thea Pharma, 오스트리아
70% EtOH	Merck, 독일	1070172511	앱솔루트 에탄올을 70% v/v의 제조를 위해 ddH2O에 희석하였다
2.5% 엔로플록사신	Bayer, 독일		예방적 항생제
카르프로펜	화이자, 미국		진통제, 50mg/ml
트윈-20	Sigma-Aldrich, 독일	P9416
펜토바르비탈	Richter Pharma, 오스트리아		펜토바르비탈 나트륨, 400mg/ml
인터페론 감마	PeproTech, 미국	400-20
종양 괴사 인자 알파	R&D Systems, 미국	510-RT-050/CF
rMOG1-125	스웨덴 Karolinska Institute의 Centre of Molecular Medicine에서 자체 제품		재조합 랫트 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질, N-말단의 아미노산 1-125, 상업적으로도 이용 가능: AnaSpec, AS-55152-500, USA
불완전한 프로인트 보조제	Sigma-Aldrich, 독일	F5506
소 혈청 알부민	Sigma-Aldrich, 독일	A9576
Peroxidase 기질 용액	Vector Laboratories, 미국	SK-45000
Stereotactic 프레임	David Kopf Instruments, 미국
카테터, MRI 적합	PlasticsOne, 미국	8IC315GPKXXC
더미 캐뉼러	PlasticsOne, 미국	8IC315DCNSPC
플라스틱 나사, MRI 적합	PlasticsOne, 미국	8L080X093N01
커넥터 캐뉼러	PlasticsOne, 미국	8IC313CXSPCC
2mm 팁 크기의 스크류 드라이버
유연한 샤프트 익스텐션을 통한 드릴	Proxxon, 독일	28 472 번, 28 706 번, 28 620 번,
드릴 비트, 원형, 0.5 mm	Hager & Meisinger, 독일	레프310 104 001 001 009
드릴 비트, 꼬임, 1.3 mm	Hager & Meisinger, 독일	레프350 104 417 364 013
메스	Braun, 독일	비비510
메스 손잡이	Fine Science Tools, 독일	91003-12
코튼 팁 어플리케이터	Henry Schein Medical, 오스트리아	900-3155
수술용 가위	Fine Science Tools, 독일	14101-14, 14088-10
수술용 겸자	Fine Science Tools, 독일	11002-12, 11251-35
불독 클램프	Fine Science Tools, 독일	18050-35
동종발열 담요	TSE 시스템, 독일
적외선 램프	Beurer, 독일	616.51
치과 경화 광	계림 딱따구리 의료, 중국
흡수성 봉합사	Johnson & Johnson, 벨기에	V792E는
프로그래밍 가능한 주사기 펌프	World Precision Instruments, 미국	알-1000
시험 장갑
수술 가운
전기면도기	Aesculap, 독일	GT420
휘발성 마취 기화기	Rothacher Medical, 스위스	이력서 30-301-D
휘발성 마취 기화기용 산소 공급원	Air Liquide, 오스트리아	19,113
휘발성 마취실	Rothacher Medical, 스위스	PS-0347
쥐를 위한 마취 마스크	Rothacher Medical, 스위스	PS-0307-A
주사기 1ml	Codan, 덴마크	참조 62.1612
주입을 위한 26 계기 바늘	Braun, 독일	4657683
사이토카인 주사 및 면역을 위한 20 게이지 바늘	Braun, 독일	4657519
루어 락 팁 유리 주사기	Poulten & Graf, 독일	7.140-37
3방향 마개	Becton Dickinson, 스웨덴	394600
37°C 인큐베이터	Kendro, 독일	50042301
마이크로피펫	Gilson, 미국	F167350

(영문) (영문) 년 년 년 년 명 시리즈 명 년