HIV에 대한 공학적 면역을 가진 인간화 마우스 모델 구축

Abstract

출처: Zhen, A., et al. 인간화 마우스 모델에서 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 마우스 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 인간 태아 흉선 조직과 조작된 조혈모세포(HSC)는 면역이 심하게 저하된 쥐의 신장 캡슐에 이식됩니다. HIV에 대항하여 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 HSC는 흉선 조직과의 공동 국소화를 촉진하는 젤라틴 단백질 혼합물에 혼합되어 있습니다. 시술 후 HSC는 다양한 인간 면역 세포로 분화되어 HIV에 대한 기능적 인간 면역 체계를 가진 인간화 마우스 모델을 개발합니다.

Protocol

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다. 동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. CD4 키메라 항원 수용체로 설계된 인간화 마우스의 구성

1. 태아 흉선 처리 및 태아 간에서 CD34+ HSC 분리
   1. 흉선 가공
      1. 15ml 원뿔형 튜브에 인산염 완충 식염수(PBS), pH 7.4로 흉선을 부드럽게 씻습니다. 세탁 단계를 3-4회 반복합니다.
      2. 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트(RPMI) 배지 7ml + 소 태아 혈청(FBS) 10% + 페니실린/스트렙토마이신(펜/연쇄상구균)을 추가합니다. 모든 것을 멸균 100mm 페트리 접시에 넣으십시오.
      3. 메스를 사용하여 흉선을 약 1mm²의 작은 조각으로 자릅니다. 96웰 플레이트의 단일 웰에 있는 모든 흉선 조각을 놓습니다. 흉선 조각을 96웰 플레이트로 옮길 때 구부러진 뭉툭한 집게를 사용하십시오.
         1. 조직이 건조되지 않도록 모든 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
CD34 마이크로비드 키트	밀테니	Tel.: 130-046-702	인간 CD34+ 전구 세포 분류용
뱀뱅커	와코	Tel.: 302-14681	세포 동결용
QIAamp 바이러스 RNA 키트	키아겐	52904	혈청의 바이러스 부하를 측정하기 위해
MACSQuant 유세포 분석기	밀테니		흐름 해석의 경우
BD LSR포르테사™	BD 생명과학		흐름 해석의 경우
히알루로니다아제	시그마	H6254-500MG	조직 소화를 위해
데옥시리보뉴클레아제 I	워 딩 턴	LS002006	조직 소화를 위해
콜라겐 분해 효소	생명 기술	제17104-019	조직 소화를 위해
CFX 실시간 PCR 검출 시스템	비오라드		바이러스 부하(viral load) 및 유전자 발현 측정용
마우스, 균주 NOD. Cg-PRKDCSCID IL2RGTM1Wjl/SzJ	잭슨 연구소	5557	인간화 된 마우스를 구성하기 위해
페니실린 스트렙토마이신(Pen Strep)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	10378016	세포 배양용
피페라실린/타조박탐	화 이자	조신	항진균
암포테리신 B (진균성 항진균제)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	제15290-018	항진균
AUTOCLIP 운드 클립, 9 mm - 1000 개	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	427631	수술용
멸균 폴리 강화 오로라 수술 가운, 케이스당 30	메드라인	DYNJP2707	수술용
봉합사, 4-0, 비크릴	오웬스와 마이너	23000J304H	수술용
알코올 준비 패드	오웬스와 마이너	3583006818	수술용
장갑, 수술, 6 1/2	오웬스와 마이너	4075711102	수술용
Yssel의 무혈청 T 세포 배지	제미니 바이오 제품	400-102	CD34+ 세포 형질도입용
인간 혈청 알부민	시그마-알드리치	A9511	CD34+ 세포 형질도입용