형질전환된 효모 세포를 마우스 장 면역 체계로 경구 전달

초록

출처: Hudson, L. E. et al., 생쥐의 구강 배기에 따른 프로바이오틱 효모의 변형 및 위장 면역 조직으로부터의 회복.J. Vis. 특급 (2016)

이 비디오는 형질전환된 효모 세포를 마우스 모델로 경구 투여하는 방법을 보여줍니다. 형질전환된 효모 세포는 위(gavage) 기법을 사용하여 경구 투여되어 마우스의 위장에 도달합니다. 그 후, 세포는 소장으로 이동하고, 여기서 마이크로폴드 세포가 세포를 집어삼키고 Peyer's patch로의 전달을 용이하게 하고 장 면역 체계에 접근할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. UV 돌연변이 유발로 보조 영양 효모 균주 생성

1. 생존 곡선을 생성하여 필요한 자외선(UV) 조사 선량을 결정합니다.
   1. 표준 절차에 따라 YPD(효모 추출물, 펩톤, 덱스트로오스) 배지 및 표 1에 나열된 기타 시약을 준비하고 단일 콜로니를 5-10ml의 YPD 배지에 접종합니다. 롤러 드럼에서 30°C O/N에서 포화 상태로 최소 8시간 동안 배양합니다.
   2. 분광광도계를 사용하여 플라스틱 큐벳에서 세포를 물에 1:10으로 희석하여 밤새(O/N) 배양의 세포 농도를 측정합니다. 멸균 증류수 20ml에 세포를 10⁷ cells/ml의 농도로 희석합니다.
   3. 희석된 세포를 멸균 플라스틱 페트리 접시에 붓고 뚜껑을 제거한 상태에서 플레이트를 UV 전구 아래 14cm에 놓습니다.
   4. 세포를 0 μJ, 5,000 μJ, 10,000 μJ, 15,000 μJ, 20,000 μJ, 25,000 μJ, 30,000 μJ, 40,000 μJ, 및 50,000μJ의 자외선 조사.....

결과

그림 1. YPD 배지에서 자란 효모 군집. UV 조사 후 프로바이오틱 효모의 생존 가능한 집락 형성 단위(CFU)를 보여주는 YPD 플레이트의 예. 세포를 연속적으로 희석하여 개별 CFU를 구별하고 계수할 수 있도록 했습니다.

그림 2. 이배체 프로바이오틱 효모의 생존 곡선. 총 도금 세포의 백분율로 나타낸 생존 가능한 S. boulardii CFU의 수는 UV 조사의 각 μJ 선량(실선)에 대해 표시되었습니다. 빨간색 세로선은 이 효모 균주의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
SmartSpec 3000 분광광도계	바이오라드	170-2501	세포 농도를 측정하기 위한 분광 광도계와 효모 배양의 OD600의 예
뉴 브런 즈윅 롤러 드럼	에펜도르프	M1053-4004	효모 배양 배양을 위한 롤러 드럼의 예
UV 스트라탈링커 2400	스트라타젠	제400075-03	예 stratalinker
스튜어트 콜로니 카운터 SC6PLUS	11983044	피셔 사이언티픽	확대 기록이 있는 플레이트 스탠드는 펜의 압력을 감지하여 식민지 수를 기록합니다
Scienceware 콜로니 카운터	F378620002	Bel-Art 사이언스웨어	휴대용 식민지 카운터 펜
복제 도금 장치	피셔브랜드	09-718-1	복제 도금 스탠드 및 패드의 예
벨벳 사각형	피셔브랜드	09-718-2
L자형 멸균 세포 스프레더	피셔브랜드	14665230
디옥시리보핵산(Deoxyribonucleic acid), 연어 고환에서 단일가닥	시그마-알드리치	D7656-1ML	효모 LiOAc 형질전환을 위한 운반체 DNA의 예
개바지 바늘	브레인트리 사이언티픽	N-PK 002	15-20g 마우스의 경우 제안된 바늘은 22게이지(1.25mm 볼), 1인치 길이의 직선 재사용 가능한 개비지 바늘입니다. 무게가 20g을 초과하는 마우스의 경우 20게이지 이상의 직선 또는 곡선 개비지 바늘을 사용할 수 있습니다
1mL 멸균 슬립 팁 일회용 투베르쿨린 주사기	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	BD 309659
Electron Microscopy Sciences 7"(178mm) 톱니 모양의 팁, 넓은 그립 겸자와 같은 무딘 집게	전자 현미경 과학	77937-28	해부에 필요한 뭉툭한 집게의 예
직선 및 곡선 해부 가위	전자 현미경 과학	72966-02 및 72966-03	해부에 필요한 가위의 예

년 (영문) 호 . .