Mycobacterium bovis BCG에서 표적 항원을 제시하기 위한 Avidin-Biotin 접합 기술

초록

출처: Liao, T. A., et al., Expression of Exogenous Antigens in the Mycobacterium bovis BCG Vaccine via Non-genetic Surface Decoration with the Avidin-biotin system. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 Mycobacterium bovis BCG에 항원을 적재하여 면역원성을 개선하는 기술을 보여줍니다. 이 방법은 avidin-biotin 시스템을 사용하여 박테리아 표면을 외인성 항원으로 코팅합니다.

프로토콜

1. BCG 세포 표면의 비오틴화

1. OD = 0.5-1.
   가 될 때까지 50rpm의 셰이커 플랫폼에서 37°C에서 10% OADC(올레산, 알부민 및 포도당 용액) 및 0.05% Tween 80을 사용하여 Middlebrook 7H9 육수에서 BCG를 성장시킵니다 참고: BCG는 생물안전성 2등급 병원체이며 BCG와 관련된 모든 실험은 적절한 개인 보호 장비와 함께 생물 안전 캐비닛에서 수행해야 합니다.
2. 500μL의 얼음처럼 차가운 내독소가 없는 PBS와 0.1% Tween80(PBST)(pH 8.0)으로 10^9BCG를 3회 세척합니다. BCG 펠릿을 멸균 내독소가 없는 PBS에 현탁시킵니다.
3. 사용 직전에 10mM Sulfo-NHS SS 비오틴 1mL를 멸균 여과수에 넣어 준비합니다.​
   1. 1mL의 0.5mM Sulfo-NHS SS 비오틴으로 박테리아를 실온에서 30분 동안 배양합니다.
4. 비반응 비오틴화 시약을 제거하기 위해 500μL의 냉장 PBST로 라벨링된 박테리아를 3회 세척합니다.
   1. 1mL의 PBST에 펠릿을 다시 현탁시킵니다.

2. 단량체 Avidin-Fusion 단백질과 Biotinylated BCG 표면의 결합

1. 5 x 10⁸ 비오틴화된 BCG와 Avi-단백질(PBS-T에서 10μg/mL 최종)을 쉐이커 플랫폼에서 실온에서 1시간 동안 혼합합니다.
2. 500μL의 냉기 PBST로 박테리아를 3회 세척합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
내독소 무함유 RPMI 1640	스템셀 기술	36750
Sulfo-NHS SS 비오틴	써모 피셔	21328
미들브룩 7H9 육수	BD 진단 시스템	271310
오아디씨	BD 진단 시스템	B11886
트윈 80	시그마-알드리치	P1379

(영문)