지카 바이러스 성장의 강력한 억제제로서 인터페론을 스크리닝하기 위한 체외 분석

초록

출처: Contreras, D. et al., 지카 바이러스 감염성 세포 배양 시스템 및 인터페론의 체외 예방 효과. J. Vis. Exp. (2016)

이 비디오는 인간 병원체인 지카 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 있는 인터페론을 스크리닝하기 위한 체외 분석을 보여줍니다. 숙주 세포 내에서 지카 바이러스는 내재화 시 증식을 거쳐 주변 세포를 감염시키고 뚜렷한 영역 또는 바이러스 플라크를 생성합니다. 항바이러스제 역할을 하는 I형 인터페론은 바이러스 증식을 방해하여 숙주 세포 단층에서 바이러스 플라크의 형성을 방지합니다.

프로토콜

1. 지카 바이러스 감염에 대한 사이토카인 라이브러리 스크리닝

1. 12웰 플레이트를 사용하여 웰당 1 x 10⁵개의 세포에서 나이브 베로 세포를 시드합니다. 세포가 부착되면(시딩 후 6시간) 각 사이토카인을
   에 추가합니다. 생물학적 복제물의 표시된 농도(2ml 용량/웰). 차량(PBS) 단독 제어를 포함합니다.
2. 치료 후 12시간에 지카 바이러스 감염(웰당 400μl당 0.1의 MOI)을 수행합니다. 감염이 없는 음성 대조군 웰을 포함합니다(모의).
3. 감염 후 4시간이 지나면 바이러스 접종물을 사이토카인 처리된 배지(2ml)로 교체합니다. 37°C에서 추가로 44시간 동안 세포를 배양합니다.
4. 감염 후 48시간이 지나면 위상차 현미경을 사용하여 바이러스 플라크를 계수하고 40X 배율에서 감염된 세포의 대표 이미지를 획득합니다(그림 1).

결과

그림 1: 인터페론은 강력한 항지카 바이러스 활성을 보여줍니다. (A) 비히클 대조군과 비교하여 다양한 사이토카인에 의한 지카 바이러스 성장의 조절을 보여주는 그래프. 평균값과 표준 편차가 막대 그래프에 표시됩니다. 인터페론은 지카 바이러스 복제를 통계적으로 유의미하게 억제하는 것으로 나타났습니다(p값 <0.05). (B 및 C) 사이토카인 처리 유무에 관계없이 지카 바이러스에 감염된 세포의 위상차 이미지. 감염된 세포에 의해 형성된 바이러스 플라크는 병소로 볼 수 있습니다. 인터페론 처리된 웰에는 바이러스 플라크가 없습니다. 음성 대조군으로 포함된 ZIKV 감염이 없는 모의 대조군. (스케일 ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Vero 세포주	증권 시세	CCL-81
지카 바이러스 균주 PRVABC59	미국 질병통제예방센터(Centers for Disease Control and Prevention, CDC)
일리노이 -6	페프로텍	200-06
IL-1 알파	페프로텍	200-01ᅡ
TNF-알파	페프로텍	300-01ᅡ
인터페론 알파 A	R&D 시스템	재질 보기 11100-1
인터페론 베타	페프로텍	기원전 300-02년
인터페론 감마	페프로텍	300-02
원심분리기 5415R	에펜도르프	5415R
원심분리기 5810R	에펜도르프	5810R
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