Generating Neural progenitors from Embryonic Stem Cells in Serum-Free Monolayer Cultures(무혈청 단층 배양에서 배아 줄기 세포로부터 신경 전구체 생성)

초록

출처: Wongpaiboonwattana, W., et al. Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Serum-free Monolayer Culture(혈청이 없는 단층 배양에서 마우스 배아 줄기 세포의 신경 분화) Exp.(2015년)

이 비디오는 무혈청 배지를 사용하여 마우스 배아 줄기 세포에서 신경 전구 세포를 생성하는 프로토콜을 보여줍니다. 무혈청 배지에 현탁된 배아 줄기 세포의 원하는 농도는 젤라틴으로 코팅된 커버슬립에 도금됩니다. 최적의 세포 밀도에서 세포는 자가분비 신호 인자를 생성하고, 이 인자는 무혈청 배지의 신경 분화 유도 인자와 함께 배아 줄기 세포가 신경 전구세포로 분화되도록 촉발합니다.

프로토콜

1. 미디어 준비

참고: 이 프로토콜은 변형된 N2 보충제로 보충된 DMEM/F12와 B27 보충제로 보충된 Neurobasal의 두 가지 개별 매체를 일반적으로 1:1 비율로 혼합하여 사용하는 데 의존합니다.

1. 15ml 튜브에 성분을 혼합하여 변형된 N2 보충제를 준비합니다. 이것을 소용돌이치거나 필터링하지 마십시오. 용액이 투명해질 때까지 튜브를 뒤집어 혼합합니다.
   1. DMEM/F12 7.2ml를 피펫팅한 다음 25mg/ml 인슐린(0.01M HCl로 구성) 1ml를 넣고 튜브를 뒤집어 잘 섞습니다. 솔루션이 명확해질 때까지 몇 분 정도 걸립니다.
   2. 100 mg/ml 아포-트랜스페린 1 ml(물에 함유), 0.6 mg/ml 프로게스테르논 33 μl(에탄올에 함유), 160 mg/ml(1 M) 푸트레신(1 M) 푸트레신(100 μl), 3 mM 아셀렌산나트륨 10 μl(물에 함유) 및 7.5% 소 혈청 알부민 666 μl를 넣고 튜브를 잘 섞는다. 2.5ml로 분주하고 -20 °C에서 최대 2 개월 동안 보관하십시오.
2. 미디어를 준비합니다.
   1. DMEM/F12 2....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
소 태아 세럼	생명 기술	10270-106
DMEM/F12	생명 기술	제11320-074
Neurobasal 배지	생명 기술	제21103-049
StemPro Accutase 세포 해리 시약	생명 기술	A11105-01
B-27 보충제, 무혈청	생명 기술	제17504-044
인슐린	시그마	I6634	멸균 0.01M HCl로 재구성
아포 트랜스페린	시그마	T1147	멸균수로 재구성
프로게스테론	시그마	P8783	에탄올로 재구성
푸트레신	시그마	P5780	멸균수로 재구성
아셀렌산나트륨	시그마	S5261 (영어	멸균수로 재구성
소 알부민 분획 V	생명 기술	제15260-037
L-글루타민	생명 기술	제25030-081	글루타민은 일반적으로 침전되므로 사용하기 전에 완전히 용해되었는지 확인하십시오.
젤라틴	시그마	G1890
6웰 조직 배양 접시	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	140675
24웰 조직 배양 접시	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	142475
96웰 조직 배양 접시	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	167008
지맘	생명 기술	제11710-035
소 태아 세럼	생명 기술	10270-106
MEM 비필수 아미노산 용액	생명 기술	제11140-050
나트륨 피루브산	생명 기술	제11360-070
2-메르캅토에탄올	시그마	M7522
25cm2 조직 배양 플라스크	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	156367

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