쥐 성상세포를 분리하고 배양하는 간단한 기술

초록

출처: Wolfes, A. C., et al., 빠르고 간단하며 저렴한 AWESAM 프로토콜을 사용하여 생체 내 유사 쥐 성상세포 배양. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오는 다른 뇌 세포와 분리하여 쥐 성상세포를 배양하는 간단한 방법을 보여줍니다. 배양 중에 성상세포 특이적 배지를 사용하고 비성상세포 세포의 부착을 억제함으로써 이 방법은 성상세포를 선택적으로 배양합니다. 이러한 배양된 성상세포는 미세한 과정을 통해 성상 형태를 나타냅니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 쥐 또는 쥐 뇌 해부

참고: 마우스와 랫트 모두 사용할 수 있습니다. P8보다 나이가 많은 동물도 사용할 수 있지만(P12까지 테스트했습니다), 수막을 제거하는 것은 점점 더 어려워질 것입니다. 더욱이, 나이 든 동물의 뇌세포는 조직 해리 중에 끊어질 수 있는 복잡한 과정과 연결을 형성하여 세포 사멸을 증가시키기 때문에 세포 수율과 건강이 감소할 것입니다. 피질 제제는 여기에 설명되어 있지만 다른 뇌 영역도 사용할 수 있습니다.

1. 0.05% 트립신-EDTA를 37°C 수조에 넣습니다.
2. CO₂ 농도를 천천히 올리고 뇌를 분리하여 동물(E19 새끼의 경우 임신한 쥐 또는 P0-P8 동물)을 안락사시킵니다. 다음 단계에서는 멸균 기술이 필요합니다.
3. 배아 조직을 다루는 경우, 먼저 자궁에서 배아를 제거하고 배아 주머니를 연 다음, 즉시 가위로 머리를 잘라낸다. 모든 헤드가 절단되면 예냉각된 해부 매체로 옮깁니다.
   1. 머리가 배지에 잠기면 집게로 피부와 두개골(둘 다 어....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.05% 트립신-EDTA	지브코	25300054	사용하기 전에 37ºC 수조에서 따뜻하게 하십시오
0.25% 트립신-EDTA	지브코	제25200-056	사용하기 전에 37ºC 수조에서 따뜻하게 하십시오
B-27 보충제	지브코	제17504-044	50X 재고
글루타맥스	지브코	제35050-061	100X 주식
페니실린 / 스트렙토마이신	지브코	제15070-063	50 재고; 페니실린 : 5000 U/ml; 스트렙토 마이신 : 5000 μg / ml
Neurobasal 배지	지브코	21103049	L-글루타민 무함유
DMEM을 참조하십시오.	지브코	41966029
HBEGF (하이비그에프)	시그마	4643
헤페스	지브코	15630080
HBSS (하이브에스)	지브코	14170112
증권 시세	지브코	10437028
PBS (PBS)	지브코	10010049	1배
100 μm 나일론 셀 스트레이너	BD (영어)	제352360
트리판 블루	시그마	T8154
세포 배양 인큐베이터	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	Hera Cell 240i 세포 배양 인큐베이터
실험실용 쉐이커	하이돌프	로타맥스 120	세포 배양 인큐베이터 내부 사용
원심 분리기	에펜도르프	5810 R

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