Isolation and Culturing of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

초록

출처: Kim, J. Y., et al. 마우스 callosal zone에서 성인 신경 줄기 세포의 분리 및 배양. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오는 쥐 뇌의 굵은 아래 영역에서 신경 줄기 세포를 분리하고 배양하는 과정을 보여줍니다. 그것은 조직을 해부하고, 효소 해리를 일으키고, 분화 인자로 배양하여 성숙한 신경 세포로 발달하는 것을 포함합니다.

프로토콜

1. 재료 및 배양 배지의 준비

1. SCZ(Subcallosal zone)의 해부 및 해리를 위해 뇌 매트릭스, 양날 면도날, 겸자를 알루미늄 호일로 감싼 후 고압멸균으로 살균합니다.
2. 쥐의 뇌 전체를 씻어내기 위해 차가운 PBS(인산염 완충 식염수) 완충액 50ml를 준비합니다.
3. 해부 현미경을 설치하고 뇌 해부(오토클레이브 가위 및 집게)와 SCZ 분리(주사기 1ml, 바늘 30G, 뇌 매트릭스 및 미세 집게)에 필요한 수술 도구를 준비합니다.
4. N2 매체의 준비 :
   1. 2% B27, 1% N2 보충제 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 포함된 F-12/DMEM(+L-글루타민, +중탄산나트륨) 배지를 준비합니다.
      참고: 성장 배지는 N2 배지 및 성장 인자(20ng/mL 정제 표피 성장 인자(EGF) 및 20ng/mL 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF2))로 구성됩니다.
5. 조직 소화를 위해 분해 완충액(40 unit/ml papain, 2.4 unit/ml dispase II, PBS의 2% 페니실린-스트렙토마이신)을 준비합니다.
6. 코팅 플레이트 및 커버 슬립의 준비 :
   1. 폴리-L-오르니틴(PLO; 0.01%)과 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM/F12	지브코	제11320-033	L-글루타민, 중탄산나트륨
펜/연쇄상구균	인비트로젠	15140-122
N2 보충제	지브코	제17502-048
B27 보충제	지브코	제17504-044
bFGF	R&D	233-FB
증권 시세	지브코	PHG0313
PBS(10배)	바이오솔루션	BP007ᅡ	1X 희석
HBSS (하이브에스)	지브코	제14175-095
디스플레이 II	로슈	TEL.04-942-078-001
파파인	워 딩 턴	3126
아카쿠타아제	정보통신기술(ICT)	AT-104
가는 집게	WPI (영어)	555229F
가위	스토츠	E3321-C
뇌 매트릭스 (1mm)	RWD	68707
양날 면도기	도르코	세인트-300
30 게이지 바늘	성심	N1300
15 ml 튜브	증권 시세	50015
튜브 50ml	증권 시세	50050
35mm 접시	증권 시세	10035	페트리쉬
100mm 접시	증권 시세	10090	페트리쉬
커버 슬립(18mm)	데크레이저	111580
12 웰 디쉬	증권 시세	32012	비코팅
6 웰 접시	증권 시세	32006	비코팅
PLO (폴리에틸렌)	시그마	P4957	0.01%
라미닌	지브코	23017-015	10 밀리그램 / 밀리람베르트
네스틴	밀리포어	메이브353	마우스 (1:1000)
브르두	아브캠	AB6326	쥐 (1:500)
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