Organotypic Slice 공동 배양 모델에서 뇌종양 확립

초록

출처: Chadwick, E. J. et al. 종양 미세환경 및 표적 약물 요법 연구를 위한 뇌 종양/유기형 슬라이스 공동 배양 시스템. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 3D 공동 문화 시스템의 개발을 보여줍니다. 쥐의 뇌 절편을 막에 놓고 형광 표지된 인간 뇌종양 세포가 그 위에서 자랄 수 있도록 합니다. 시스템이 준비되면 이미징을 위해 염색됩니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 인서트에 슬라이스 도금

1. 6웰 플레이트의 각 웰에 1,200μl의 슬라이스 배양 배지를 채웁니다. 사용하지 않은 웰은 1,200μl PBS로 채우고 플레이트의 중앙 공간을 5ml 1x PBS로 채웁니다. 이 플레이트를 37°C에서 보관하십시오.
2. 홈이 있는 스푼 도구를 사용하여 브레인 슬라이스를 인서트의 미디어에 넣고 슬라이스가 완전히 잠길 때까지 부드럽게 밀어 넣습니다. 모든 슬라이스에 대해 반복합니다.
3. p1000을 사용하여 인서트 상단에서 슬라이스 배양 배지 1ml를 꺼내 웰 바닥에 분배합니다. 뇌 절편 주위의 아가로스 가장자리가 보일 때까지 여분의 매체를 제거하고 폐기합니다. 나머지 조각에 대해 이 작업을 수행합니다.
4. 집게로 테두리를 잡고 인서트를 들어 올리고 기울여 여분의 매체를 제거합니다. 그런 다음 인서트를 1ml의 슬라이스 배양 배지가 들어 있는 35mm² 접시에 빠르게 옮깁니다. 날카로운 집게 2쌍을 사용하여 조직 주위의 아가로스를 제거하고, 막에 구멍을 뚫거나 늘리거나 손상시키거나, 자르거나, 찌르지 않도록 주의하십시오(아가로....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
헤페스	인비트로젠	17504044
포도당	인비트로젠	17502048
페니실린 스트렙토마이신	생명 기술	15140-122
HBSS (하이브에스)	생명 기술	제14185-052
나-27	생명 기술	제17504-044
엔2	생명 기술	제17502-048
글루타맥스	생명 기술	35050061
Neurobasal-A- 미디엄 마이너스 페놀 레드	인비트로젠	12349015
낮은 융점 Agarose	프로메가	V2111
Slice Culture 삽입	밀리포어	PICM0RG50
라미닌	인비트로젠	23017015
cm-디아이	인비트로젠	V22888
마이크로스피어	생명 기술	F-21010

년 호 호 호