출처: Koss, K. M, et al. 신경염증의 체외 모델링을 위한 1차 신경교세포의 개선된 3D 하이드로겔 배양. J. Vis. 특급 (2017).
이 비디오는 신경교세포의 3차원 배양을 확립하는 기술을 보여줍니다. 쥐 뇌 유래 신경교세포는 세포외 기질 성분을 포함하는 광가교결합 가능한 고분자 기질 내에 캡슐화되어 있습니다. 성장 배지에서 배양하면 신경교세포가 지지 매트릭스 내에서 증식하여 3차원 배양을 생성합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
쥐의 뇌 유래 신경교세포(Rat Brain-derived glial cell)의 3차원 배양 확립
803 조회수
⸱
2025년 7월 8일
이 논문에서
초록
프로토콜
참수로 안락사된 1일차 Sprague Dawley 새끼 쥐의 뇌 조직을 추출하기 위한 프로토콜이 앨버타 대학의 동물 보호 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
1. 미세아교세포와 성상교세포 분리
참고: 분리 및 세포 배양을 위한 모든 배지는 수조에서 37°C로 예열됩니다. 행크의 균형 잡힌 소금 용액(HBSS)에는 1%의 페니실린-스트렙토마이신(PS)이 함유되어 있습니다. Ham의 F12 영양 혼합물(DMEM/F12)이 함유된 모든 Dulbecco의 변형된 Eagle's 배지에는 10%의 소 태아 혈청(FBS)과 1%의 페니실린-스트렙토마이신(PS)이 보충됩니다. 트립신과 혼합된 혼합물에만 FBS가 없습니다. 이 프로토콜의 모든 물질은 멸균(필터, 알코올, 구매 및 오토클레이브)이며 1.8단계 이후의 모든 단계는 무균 기술을 사용하여 생물 안전 캐비닛에서 수행됩니다.
- 뇌당 50mL 코니컬 원심분리 튜브에서 15mL의 HBSS 및 12.5mL DMEM/F12를 37°C로 예열하고, 15mL 코니컬 원심분리 튜브에서 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)이 함유된 0.25% 트립신 약 2mL를 예열합니다. DME....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
그림 1: 1일차 Sprague Dawley 쥐 새끼 뇌 해부.전뇌(A), 피질과 소뇌 해부(B), 수막이 있는 단일 피질(C), 겸자로 수막을 벗겨낸 이미지(D), 수막이 없는 피질(E)의 이미지.
그림 2: 메타크릴화 히알루론산(HAMA) 기반 3D 세포 배양 및 광중합 프로토콜의 개략도.신경교세포(2주 1차.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1. HAMA 종합 및 광중합을 위한 재료 | |||
| 히알루론산(HA) | 시그마-알드리치 | 53747-10지 | 연쇄상 구균, MW: 1.5 - 1.8 X 10^6 |
| 메타크릴 무수물(MA) | 시그마-알드리치 | 275585-100ML | |
| 수산화나트륨(NaOH) | 시그마-알드리치 | 221465-25지 | |
| 에탄올(EtOH) | 상업 알코올 Inc. | 무수 | |
| 인산염 완충 식염수(pH 7.4) 정제 | 피셔 사이언티픽 | 18912014 | |
| 트리에탄올아민(TEA) | 시그마-알드리치 | 90279-100ML | |
| 1- 비닐 -2pyrrolidinone (NVP) | 시그마-알드리치 | V3409-5G | |
| 에오신 Y (EY) | 시그마-알드리치 | E6003-25G | |
| 폴리디메틸실록산(PDMS) Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 키트 | 다우코닝 | ||
| 3-(트리메톡시실릴)프로필 메타크릴레이트 | 시그마-알드리치 | 440159-100ML | |
| 비커(100mL) | 코 닝 | 1000-100 | |
| 비커(500mL) | 코 닝 | 1000-600 | |
| pH 용지(Labstick) | 시그마-알드리치 | 9580 | |
| 2. 신경교세포 분리 및 세포 배양을 위한 재료 | |||
| P1-2 Sprague Dawley 쥐 새끼 | 찰스 리버 | CD Sprague Dawley 쥐 균주 코드 001 | |
| 해부기 가위 - 슬림 블레이드(소형) | 정밀 과학 도구 | 14081-09 | |
| 수술용 가위 - Toughcut(대형) | 정밀 과학 도구 | 14130-17 | |
| 가는 집게(Dumont #5) | 정밀 과학 도구 | 11521-10 | |
| 곡선형 파인 펜셉스(Dumont #7) | 정밀 과학 도구 | 11271-30 | |
| 행크의 균형 잡힌 소금 용액(HBSS) | 지브코 | 제14170-112 | |
| Dulbecco의 변형 독수리 배지와 Ham의 영양 혼합물 F-12 (DMEM/F12) | 지브코 | 제11320-033 | |
| 페니실린-스트렙토마이신(PS) | 지브코 | 15140-122 | |
| 소 태아 혈청(FBS) | 지브코 | 제12483-020 | |
| 0.25% 트립신 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) | 지브코 | 제25200-072 | |
| 폴리-L-라이신(PLL) | 시그마-알드리치 | P-6282 | |
| 50 mL 코니컬 원심분리기 튜브 | 피셔 사이언티픽 | 05-539-13 | |
| 15 mL 코니컬 원심분리기 튜브 | 피셔 사이언티픽 | 05-539-5 | |
| 12웰 조직배양처리플레이트(Cellstar) | Greiner 바이오 원 | 665 108 | |
| 10 mL 혈청학적 피펫 | 피셔 사이언티픽 | 13-676-10층 | |
| 25 mL 혈청학적 피펫 | 피셔 사이언티픽 | 12-676-10케이 | |
| 페트리 접시 (60mm X 15mm) | 피셔 사이언티픽 | FB0875713A | |
| 페트리 접시 (100mm X 15mm) | 피셔 사이언티픽 | FB0875712 | |
| 현미경 커버슬립(18mm) | 피셔 사이언티픽 | 12-545-100 18CIR |
태그
